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熒光顯微鏡的工作原理

光源多采用200W的超高壓燈作光源，它是用石英玻璃制作，中間呈球形，工作時由兩個電極間放電，引起蒸發，球內氣壓迅速升高，當完全蒸發時，可達50~70個標準大氣壓力，這一過程一般約需5~15min。超高壓燈的發光是電極間放電使分子不斷解離和還原過程中發射光量的結果。它發射很強的紫外和藍紫光，足以激發各類熒光物質，因此，為熒光顯微鏡普遍采用。

超高壓燈也散發大量熱能。因此，燈室必須有良好的散熱條件，工作環境溫度不宜太高。

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熒光顯微鏡——物鏡

各種物鏡均可應用，但盡量用消色差的物鏡，因其自體熒光極微且透光性能(波長范圍)適合于熒光。由于圖像在顯微鏡視野中的熒光亮度與物鏡鏡口率的平方成正比，而與其放大倍數成反比，所以為了提高熒光圖像的亮度，應使用鏡口率大的物鏡。尤其在高倍放大 時其影響非常明顯。因此對熒光不夠強的標本，應使用鏡口率大的物鏡，配合以盡可能低的目鏡。

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熒光顯微鏡——落射光裝置

新型的落射光裝置是從光源來的光射到干涉分光濾鏡后，波長短的部分(紫外和紫藍)由于濾鏡上鍍膜的性質而反射，當濾鏡對向光源呈45。傾斜時，則垂直射向物鏡，經物鏡射向標本，使標本受到激發，這時物鏡直接起聚光器的作用。同時，濾長長的部分(綠、黃、紅等)，對濾鏡是可透的，因此，不向物鏡方向反射，濾鏡起了激發濾板作用，由于標本的熒光處在可見光長波區，可透過濾鏡而到達目鏡觀察，熒光圖像的亮度隨著放大倍數增大而提高，在高放大時比透射光源強。它除具有透射式光源的功能外，更適用于不透明及半透明標本，如厚片、濾膜、菌落、組織培養標本等的直接觀察。研制的新型熒光顯微鏡多采用落射光裝置，稱之為落射熒光顯微鏡。

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熒光顯微鏡的使用方法

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(1)打開燈源，超高壓燈要預熱15min才能達到高的亮點。

(2)透射式熒光顯微鏡需在光源與暗視野聚光器之間裝上所要求的激發濾片，在物鏡的后面裝上相應的壓制濾片。落射式熒光顯微鏡需在光路的插槽中插入所要求的激發濾片、雙色束分離器、壓制濾片的插塊。

(3)用低倍鏡觀察，根據不同型號熒光顯微鏡的調節裝置，調整光源中心，使其位于整個照明光斑的中央。

(4)放置標本片，調焦后即可觀察。使用中應注意:未裝濾光片不要用眼直接觀察，以免引起眼的損傷;用油鏡觀察標本時，必須用無熒光的特殊鏡油;高壓燈關閉后不能立即重新打開，需待燈完全冷卻后才能再啟動，否則會不穩定，影響燈壽命。

(5)觀察。例如:在熒光顯微鏡下用藍紫光濾光片，觀察到經0.01%熒光染料染色的細胞，細胞核和細胞質被激發產生兩種不同顏色的熒光(暗綠色和橙紅色)。