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T4 RNA連接酶

用途：用RNA 3'末端標記；RNA和RNA分子間連接；寡核苷酸的環化；tRNA修飾；5' RACE中寡核苷酸連接到cDNA單鏈；在蛋白質特定位點引入非天然氨基酸。

來源：由大腸桿1菌表達，表達基因的來源為T4嗜菌體。

活性定義：37℃30分鐘內，催化1 nmol 5'-[P]-(A)12-18成為磷酸酶不能消化的環形產物所需的酶量定義為1個活性單位。

活性檢測條件：50mM Tris-HCl(pH7.5)，10mM MgCl2，10mM DTT，1mM ATP，10μM 5'-[P]-(A)12-18(10μM in 5'-termini)。

純度：不含DNA內切酶和外切酶，不含RNA酶，不含磷1酸酯酶。

酶儲存溶液：10mM Tris-HCl(pH7.5)，1mM DTT，50mM KCl，0.1mM EDTA，50%(v/v)glycerol。

Reaction Buffer(10X)：500mM HEPES-NaOH(pH8.0 at 25℃)，100mM MgCl2，100mM DTT。

低堿性磷酸酶血癥的癥狀存在異質性，其臨床癥狀多樣，需要及時進行cure

典型癥狀

1、單純牙型乳牙會出現早期脫落的情況，僅僅表現出牙齒受累的癥狀表現。

2、圍生期型患者會出現四肢短小的癥狀，主要因為嚴重骨骼礦化不足，然后造成骨骼系統異常的癥狀表現。

3、良性新生兒型患者會出現骨骼畸形的情況，比如漏斗胸，以及身材矮小的癥狀，但是這種類型的癥狀，在出生以后可以達到改善。

4、嬰兒型患者會出現牙齒早脫的癥狀，通過X-ray檢查，可以顯示未成熟牙齒早失的癥狀，如果出現佝僂病的情況，患者會出現胸廓畸形、頭顱畸形的癥狀，患者的囟門會變得寬大，但是常常會出現顱縫早閉的情況。

cDNA是指具有與某RNA鏈呈互補堿基序列的DNA。與RNA鏈互補的單鏈DNA，以其RNA為模板，在適當引物的存在下，由依賴RNA的DNA聚合酶（反轉錄酶）作用而合成，并且在合成單鏈cDNA后，再用堿處理除去與其對應的RNA以后，以單鏈cDNA為模板，由依賴DNA的DNA聚合酶或依賴RNA的DNA聚合酶作用合成雙鏈cDNA。在這種情況下，mRNA的cDNA，與原來的基因組DNA相同而且無內含子；相反地，對應于在原來基因中沒有的而在mRNA存在的3'末端的poly A序列等的核苷序列上，與外顯子序列、先導序列以及后續序列等一起反映出mRNA結構。
以Riboclone M-MLV CDNA合成技術為例。Riboclone M—MLV cDNA合成系統采用M—MLV反轉錄酶的RNase H缺失突變株取代AMV反轉錄酶，使合成的cDNA更長。該系統的鏈合成使用M-MLV反轉錄酶，cDNA第二鏈合成采用置換合成法，采用RNaseH和DNA聚合酶I進行置換合成，用T4 DNA聚合酶切去單鏈末端，方法簡便易行。