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              發(fā)布時(shí)間:2020-08-07 12:20  

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              CFSE是一種可穿透細(xì)胞膜的熒光染料,具有細(xì)胞膜通透性,能夠自由進(jìn)入細(xì)胞;當(dāng)CFSE擴(kuò)散穿過(guò)細(xì)胞膜,會(huì)與細(xì)胞內(nèi)源酯酶產(chǎn)生水解反應(yīng)而被激發(fā),發(fā)出綠色熒光,這些帶熒光的CFSE會(huì)進(jìn)一步與細(xì)胞骨架蛋白結(jié)合,形成穩(wěn)定的胞內(nèi)熒光蛋白。每當(dāng)細(xì)胞進(jìn)行分裂增殖,胞內(nèi)熒光蛋白會(huì)被平均分配到下一代細(xì)胞中,因此細(xì)胞熒光強(qiáng)度會(huì)隨著增殖代數(shù)增加而不斷地降低,可用流式細(xì)胞儀進(jìn)一步偵測(cè)分析得出細(xì)胞分裂增殖的情況。CFSE的濃度,對(duì)于終判斷細(xì)胞增殖結(jié)果有直接性的影響!




              細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)可能導(dǎo)致衰老的原因:1.細(xì)胞傳代次數(shù)比較多,一定要控制細(xì)胞傳代次數(shù)!大量擴(kuò)增細(xì)胞,將細(xì)胞進(jìn)行凍存,在必要的時(shí)候重新復(fù)蘇。2.胰酶消化時(shí)間太長(zhǎng),胰酶消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)容易導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)不佳以及胞質(zhì)疏松;細(xì)胞傳代時(shí)需要留意胰酶消化的時(shí)間。消化過(guò)度,在消化細(xì)胞時(shí)會(huì)對(duì)細(xì)胞的表面蛋白有較強(qiáng)的損傷,所以消化的時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng),建議使用合適濃度和pH值的消化酶,否則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞衰老和分化。





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