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發布時間：2021-07-08 04:32
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細胞實驗介紹——流式細胞術檢測細胞周期和凋亡
流式細胞術檢測細胞周期：
細胞周期：指細胞從前一次分裂結束起到下一次分裂結束為止的活動過程，通常由G0/G1期、S期、G2期和M期組成。G0/G1期：有絲分裂發生，細胞分裂成兩個細胞，進入下一個細胞周期，或者進入靜止期（G0期），而G0期從DNA含量上無法與G1期區分，細胞開始RNA和蛋白質的合成，但DNA含量仍保持二倍體。S期：DNA開始合成，細胞核內DNA的含量介于G1期和G2期之間。磁性細胞標記方式應用MACS技術進行磁性細胞分選重要的一點是高質量的標記。G2期和M期：當DNA成為4倍體時，細胞進入G2期。G2期細胞繼續合成RNA及蛋白質，直到進入M期。
PI法是經典的周期檢測方法。PI為插入性核酸熒光染料，能選擇性的嵌入核酸DNA和RNA雙鏈螺旋的堿基之間與之結合，其結合的量與DNA的含量成正比例關系，用流式細胞儀進行分析，就可以得到細胞周期各個階段的DNA分布狀態，從而計算出各個期的百分含量。血管生成技術一、服務介紹zhong瘤血管生成是一個極其復雜的過程，一般包括包括血管內皮基質降解、內皮細胞移行、內皮細胞增殖、內皮細胞管道化分支形成血管環和形成新的基底膜等步驟。
一般流程：細胞收集-70%酒精固定過夜-PI染色-流式細胞儀檢測。
細胞凋亡：細胞凋亡的早期就有細胞膜表面破損發生。破損時凋亡細胞表面的磷脂腺絲氨酸(PS)可以從細胞內膜翻轉至細胞的外膜。該過程發生在之前，檢測PS的表達，能反映早期凋亡。AnnexinV是Ca2 依賴的磷脂結合蛋白，對PS有很高的親和性，并且可以與暴露于細胞外的PS相結合。(-般而言，陰性分離法的磁珠用量比陽性分離法的大，陽性分離法用行更多。利用這一原理，可以將AnnexinV標記熒光來識別早期的細胞凋亡。通常利用AnnexinV-FITC和碘化丙啶(PI)來區分凋亡和壞死細胞。PI的膜通透性很差，因而只能標記壞死的細胞。
一般流程：細胞收集-PI-AnnexinV標記-流式細胞儀檢測。
結果示例：
圖 A 細胞周期檢測圖；B 細胞凋亡檢測圖
細胞實驗介紹——細胞運動能力檢測：
細胞劃痕實驗是體外模擬細胞遷移能力和修復能力快捷的檢測方法。在長滿的細胞培養板或者培養皿中，沿著中線使用移液器槍頭或者其他硬物劃1-3條平行的直線，去除中線的細胞，細胞在0h、12h、24h后，觀察細胞往中線遷移情況，判斷細胞遷移能力。
一般流程：細胞接種培養-劃痕-不同時間點拍照
細胞遷移和侵襲實驗是體外模擬細胞遷移和侵襲能力的檢測方法。使用不同孔徑的聚碳酸酯膜transwell小室放入培養板中，將細胞接種于小室中，利用培養液成分的差異誘導細胞運動，檢測細胞的遷移和侵襲能力的差異。
一般流程：transwell小室準備-細胞接種-細胞培養-transwell小室染色-顯微鏡拍照
圖 A 細胞劃痕實驗圖；B，C 細胞遷移和侵襲實驗圖
透射電鏡觀察自噬小體方法
利用光學顯微鏡，借助相應的染色方法，可以觀察細胞凋亡時會出現的一系列形態特征。常用的染色法包括臺盼藍、橙 / 化乙啶（AO/EB）、Giemsa 和 HE 法等。在光學顯微鏡下可以觀察到核固縮、質濃縮和凋亡小體等典型的凋亡現象。
電鏡形態學觀察法是一種比較經典、可靠的方法，被認為是確定細胞凋亡的金標準。電鏡下凋亡細胞表現為染色質凝集、核濃縮、核裂解、胞漿收縮和胞膜具有發泡現象及凋亡小體出現等。
選擇實驗外包公司需要注意哪些事項？
報價
報價單一定要有明細。規范的外包公司會根據實驗方案里的各項內容進行核算報價，材料是多少、人工檢測是多少，可以看到每一筆錢花在哪里，避免籠統的報價。另外注意不要一味地追求低價，做過實驗的都知道實驗成本，外包還需要考慮人工成本。如果價格過低，實驗數據就難以保證可靠和來源了。公司先后獲得“江蘇省民營科技企業”、“江蘇省科技型中小企業”、“江蘇省專精特新中小企業”等榮譽資質，連續多年被評為“東南大學國家大學科技園企業”。當然報價也不能虛高，做好是能在有限的經費中盡量保證課題完整性。可以要求公司根據預算來調整優化方案，盡可能節約成本。
