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發(fā)布時間:2021-06-02 06:13  
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親和柱介紹
生物分子之間的親和識別包括抗體和抗原、酶和底物和受體等之間的親合作用,這些親和作用屬于生物專一性識別;此外,某些物質(zhì)和生物大分子之間還有一些特異性作用,如染料和某些酶(特別是脫氫酶和激酶等),植物凝集素和糖蛋白,金屬離子和蛋白質(zhì)表面的組氨酸等之間的作用,都可以應(yīng)用于親和分離過程。
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親和柱的應(yīng)用
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◆ 食品、飼料中真菌的測定:見相關(guān)的國家標(biāo)準(zhǔn)(如GB 5009系列的真菌測定標(biāo)準(zhǔn)方法)、其他行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、地方標(biāo)準(zhǔn)等。
◆ 中藥材中真菌的測定:如《中國藥典》2020版 通則2351 真菌測定法,品種正文中黃曲霉、玉米赤霉烯酮檢查項(xiàng)。
◆ 食品中農(nóng)殘、營養(yǎng)成分等其他檢測項(xiàng)目。
親和柱的測定原理
親和柱,吸附力高柱容量大,適合于和HPLC、LC-MS及DON酶免分析試劑盒結(jié)合使用,定量檢測DON。適用于谷物、飼料等樣本中的DON凈化處理,提高了樣品的純度,純化后的提取液可用不同的分析方法測定。
測定的基礎(chǔ)是抗原反應(yīng),抗嘔吐毒素(DON)的連接在柱內(nèi)凝膠介質(zhì)上,樣品中的DON經(jīng)過提取、過濾、稀釋,然后將樣品提取液緩慢通過DON親和柱,在親和柱內(nèi),DON與結(jié)合,洗滌液通過親和柱除去未被結(jié)合的雜質(zhì)。之后洗脫DON,然后進(jìn)行相關(guān)分析。
親和柱——親和層析的應(yīng)用
抗原和利用抗原、之間高特異的親和力而進(jìn)行分離的方法又稱為親和層析。例如將抗原結(jié)合于親和層析基質(zhì)上,就可以從中分離其對應(yīng)的。在蛋白質(zhì)工程菌發(fā)酵液中所需蛋白質(zhì)的濃度通常較低,用離子交換、凝膠過濾等方法都難于進(jìn)行分離,而親和層析則是一種非常有效的方法。將所需蛋白質(zhì)作為抗原,經(jīng)動物后制備,將與適當(dāng)基質(zhì)偶聯(lián)形成親和吸附劑,就可以對發(fā)酵液中的所需蛋白質(zhì)進(jìn)行分離純化。抗原、間親和力一般比較強(qiáng),其解離常數(shù)為108-10?12M,所以洗脫時是比較困難的,通常需要較強(qiáng)烈的洗脫條件。可以采取適當(dāng)?shù)姆椒ㄈ绺淖兛乖⒎N類或使用類似物等來降低二者的親和力,以便于洗脫。
另外金黃色球菌蛋白A(ProteinA)能夠與球蛋白G(IgG)結(jié)合,可以用于分離各種IgG。