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發布時間：2021-06-15 03:33
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低溫生物為什么可以在零下保藏？
低溫生物都是需要保護劑的，動物細胞也可以。細菌結構問題使得它比較容易保存，只用加10%左右的甘油就可以在-20攝氏度保存。動物細胞需要加DMSO等，并且需要放到-80或者液氮才行冷凍保藏是指將于-20℃以下的溫度保藏，通過冷凍，使微生物代謝活動停止。就是通過低溫來抑制微生物的生命活動，在保藏過程中，必須使微生物的代謝處于不活躍或相對靜止的狀態，才能在一定的時間內使其不發生變異而又保持生活能力。低溫、干燥和隔絕空氣是使微生物代謝能力降低的重要因素。
喚醒盛水的低溫生物
目前，保藏中心保存有各類微生物資源5700種、50000余株，用于程序的生物材料有1萬余株。那么，數目龐大的微生物資源，從“清醒”到被“沉睡”經歷了什么？
“首先進行存活度和純度檢測，然后用基因測定來核實的正確性，繼而用真空冷凍干燥法或液氮超低溫凍結法保存。”保藏時一般兩種方法會互為備份，使用液氮法保存6份，真空法則要備份12個。
“通過冷凍技術處理后，細菌就會處于休眠狀態。如果要活化使用，則需通過相應的培養液進行活化，才能恢復活性。”以格氏嗜鹽堿為例說，復活所需的營養為：20%的氯化鈉，酪蛋白、氨基酸、pH值為9等，在適宜的溫度和培養基中，這些沉睡的細菌便會被重新喚醒。
分離篩選低溫生物的基本程序
流程
4.1 優良糖化酶菌株的分離與篩選
融化培養基→倒平板→打散孢子團粒→梯度稀釋→涂布平板→培養觀察→滴加碘液→挑菌落→接種→培養→糖化酶活力測定→保存
4.2 酸乳制品中的乳酸菌的分離
制培養基→倒平板→梯度稀釋→涂布平板→培養觀察→挑菌落→接牛乳管→培養觀察→傳代培養→挑選凝乳管→乳酸測定→保存
5 步驟
優良糖化酶菌株的分離與篩選
（1）融化淀粉察氏培養基，稍冷后倒平板與斜面數個。
（2）取種曲少許，加入10mL帶玻璃球的無菌生理鹽水的三角瓶中，用力振蕩打散孢子團粒，使之形成均勻的孢子懸浮粒。然后將其用無菌紗布過濾于無菌試管中。
（3）將上述濾液以10倍稀釋法知釋至10-7，取后3個稀釋度的稀釋液各0.2mL，于淀粉察氏培養基平板上用無菌涂布器分別依次涂布2至3個皿，30℃培養1~2d。
（5）性能測定：測定各菌落的糖化酶活力。
低溫生物篩選過程及應用價值
分離(separation)就是將一個混雜著各種微生物的樣品通過分離技術區分開，并按照實際要求和菌株的特性采取迅速、準確、有效的方法對他們進行分離、篩選，進而得到所需微生物的過程。菌株分離、篩選(screening)雖為兩個環節，但卻不能絕然分開，因為分離中的一些措施本身就具有篩選作用。工業微生物產生菌的篩選一般包括兩大部分:一是從自然界分離所需要的菌株，二是把分離到的菌株進一步純化并進行代謝產物鑒別。 ? {cF'RB. 在實驗工作中，為使篩選達到事半功倍的效果，總的說來可從以下幾個途徑進行收集和篩選: 4jis﹨W}%L3
(1)向保藏機構索取有關的菌株，從中篩選所需菌株。 ^ 5u}
(2)由自然界采集樣品，如土壤、水、動植物體等，從中進行分離篩選。 O|%> <I? I
(3)從一些發酵制品中分離目的菌株，如從醬油中分離蛋白酶產生菌，從酒醪中分離淀粉酶或糖化酶的產生菌等。該類發酵制品經過長期的自然選擇，具有悠久的歷史，從這些傳統產品中容易篩選到理想的菌株。 r N$_(%m_N
菌株的分離和篩選一般可分為采樣、富集、分離、產物鑒別幾個步驟。 8*4X%a=O f
含微生物樣品的采集 Q?7U iTZ
自然界含菌樣品極其豐富，土壤、水、空氣、枯枝爛葉、植物病株、爛水果等都含有眾多微生物，種類數量十分可觀。但總體來講土壤樣品的含菌量很多。 G ^H Z4jg
