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陽性對照和陰性對照的體外GTPγS/ GDP蛋白質上樣量

注意：體內細胞刺激將激l活可用Arf 6的大約10％，而體外GTPγS蛋白負載將激l活Arf 6的將近90％。

1，將0.5 ml每種細胞提取物等分到兩個微量離心管中（或使用1 μg純化的Arf 6蛋白）。

2，向每個試管中加入20 μl 0.5 M EDTA（終濃度為20 mM）。

3，將5 μl 100 XGTPγS（至100 μM，終濃度）加到一個試管中（陽性對照）。

4，在第二個試管中加入5 μl 100 X GDP（至1 mM，終濃度）（陰性對照）。

5，在攪拌下將試管在30°C孵育30分鐘。

6，通過將試管放在冰上并添加32.5 μl 1 M MgCl2（至60 mM，終濃度）來停止加載。

Arl3（類似Arf的3）是一種ADP-核糖基化因子（Arf）家族蛋白，在N端延伸方面不同于大多數Arf家族成員。 Arl3的核苷酸交換是快速的，并且與脂質和去污劑無關。 與GDT / GTP結合后，Arl3與一系列效應蛋白相互作用，并調節這些效應蛋白的活性，例如人類視網l膜基因4（HRG4），cGMP磷酸二酯酶的δ亞基（PDEδ）和Arl2的結合物（BART）。 Arl3還以可調節的方式結合微管，以通過與色素性視網l膜炎2（RP2）相互作用來改變胞質分裂的特定方面。 有人提出，RP2與Arl3協同作用，將光感受器中的細胞膜和細胞骨架連接為細胞的一部分

9.收集上清液并在冰上存儲樣品（約1-2 mg總蛋白）以進行中間使用，或將其冷凍并保存在-70°C下以備將來使用。

紐斯特生物技術有限公司推出的Cdc42活性檢測試劑盒主要是依據單克l隆抗l體能夠特異性的識別Cdc42-GTP結合蛋白，而不識別Cdc42-GDP結合蛋白，進而簡單并且快速的進行Cdc42的活性檢測。同時試劑盒中的Cdc42-GTP單克l隆抗l體也可以進行免l疫組化實驗中細胞和組織中Cdc42的活性監測。每套試劑盒可以進行20次檢測。

武漢紐斯特生物科技有限公司（WuhanNewEastBiotechonologyCo.Ltd），系美國生命科學試劑供應商美國NewEastBio在中國的子公司。公司位于武漢東湖高新技術開發區光谷生物城.美國NewEastBio專注于生命科學和生物技術領域，主要產品有小分子、ELISA試劑盒、蛋白等，與世界高校和研究所、世界大制藥公司、生物科技公司和醫院等客戶建立了長期穩定的合作關系，產品銷往全球。武漢紐斯特生物將攜手美國NewEastBio，負責美國品牌NewEastBio產品在中國市場的推廣、銷售及售后服務。

測定原理

NewEast Biosciences Rab35激l活檢測試劑盒基于特定于配置的抗Rab35 GTP

單克l隆抗l體，用于測量細胞提取物中或體外的活性Rab35 GTP水平

GTPγS加載Rab35激l活測定。 簡而言之，抗活性Rab35小鼠單克l隆抗l體將是

與含有Rab35-GTP的細胞裂解液一起孵育。 綁定的活動Rab35隨后將被下拉

蛋白質A / G瓊脂糖。 沉淀的活性Rab35將通過免l疫印跡分析使用

抗Rab35兔多克l隆抗l體。