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色譜分離基本原理    

在色譜法中存在兩相，一相是固定不動的，我們把它叫做固定相；另一相則不斷流過固定相，我們把它叫做流動相。     液相色譜的分離原理就是利用待分離的各種物質在兩相中的分配系數、吸附能力等親和能力的不同來進行分離的。使用外力使含有樣品的流動相（氣體、液體）通過一固定于柱中或平板上、與流動相互不相溶的固定相表面。當流動相中攜帶的混合物流經固定相時，混合物中的各組分與固定相發生相互作用。     由于混合物中各組分在性質和結構上的差異，與固定相之間產生的作用力的大小、強弱不同，隨著流動相的移動，混合物在兩相間經過反復多次的分配平衡，液相色譜使得各組分被固定相保留的時間不同，從而按一定次序由固定相中先后流出。與適當的柱后檢測方法結合，實現混合物中各組分的分離與檢測。

液相色譜儀的使用特點進行分析概要

　液相色譜儀是在經典色譜法的基礎上，引用了氣相色譜的理論，在技術中，流動相改為高壓輸送，色譜柱是以特殊的方法用小粒徑的填料填充而成，從而使柱效大大高于經典液相色譜；同時柱后連有高靈敏度的檢測器，可對流出物進行連續檢測。　　液相色譜儀特點：　　

1、高壓：液相色譜法以液體為流動相，液體流經色譜柱，受到阻力較大，為了迅速地通過色譜柱，必須對載液施加高壓。一般可達150～350×105Pa；　　

2、高速：流動相在柱內的流速較經典色譜快得多，一般可達1～10ml/min。液相色譜法所需的分析時間較之經典液相色譜法少得多，一般少于1h；　　

3、效率很高：近來研究出許多新型固定相，使分離效率大大提高；　　

4、高靈敏度：液相色譜已廣泛采用高靈敏度的檢測器，進一步提高了分析的靈敏度。如熒光檢測器靈敏度可達10-11g。另外，用樣量小，一般幾個微升；　　

5、適應范圍寬

什么是液相色譜?

液相色譜的定義是二十世紀早期由俄羅斯植物學家 MikhailS. 茨維特提出的。他先嘗試在裝滿顆粒的柱子上使用溶劑來分離從植物中提取的化合物(樹葉色素)。茨維特用顆粒填滿開口的玻璃柱。他發現兩種特殊的材料，粉筆末(碳酸鈣)和氧化鋁很有用。他將樣品(混勻植物葉的溶劑提取物)倒入柱中，并讓樣品流過顆、粒床。隨后加入純溶劑。隨著樣品由于重力自上而下流過柱子，可看到不同顏色的譜帶被分開，因為有些組分比另外一些移動得快。他將這些分開的不同顏色的譜帶與樣品中原有的不同化合物相關聯。他還根據每一種化合物對填料的化學親和性強弱，提出了分析這些化合物的分離規律。與顆粒填料有較強親和性的化合物移動慢，與溶劑有較強親和性的化合物移動快。這個過程可這樣描述:樣品中的化合物在流動的溶劑(流動相)與固體顆粒(固定相)間的分布不一樣。這樣使每一種化合物以不同的速度移動，從而產生了化合物之間的分離。

液相色譜法

色譜法的創始人是俄國的植物學家茨維特（ M.Tswett）。1906年，俄國植物學家茨維特發表了他的實驗結果：為了分離植物色素，他將含有植物色素的石油的醚提取液倒入裝有碳酸鈣粉末的玻璃管中，并用石油的醚自上而下淋洗，由于不同的色素在碳酸鈣顆粒表面的吸附力不同，隨著淋洗的進行，不同色素向下移動的速度不同，從而形成一圈圈不同顏色的色帶，使各色素成分得到了分離。他將這種分離方法命名為色譜法(chromatography)。