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親和柱的測定原理

親和柱，吸附力高柱容量大，適合于和HPLC、LC-MS及DON酶免分析試劑盒結(jié)合使用，定量檢測DON。適用于谷物、飼料等樣本中的DON凈化處理，提高了樣品的純度，純化后的提取液可用不同的分析方法測定。

測定的基礎(chǔ)是抗原反應(yīng)，抗嘔吐毒素(DON)的連接在柱內(nèi)凝膠介質(zhì)上，樣品中的DON經(jīng)過提取、過濾、稀釋，然后將樣品提取液緩慢通過DON親和柱，在親和柱內(nèi)，DON與結(jié)合，洗滌液通過親和柱除去未被結(jié)合的雜質(zhì)。之后洗脫DON，然后進(jìn)行相關(guān)分析。

親和柱——親和層析的用途

簡單來說，親和層析利用流動(dòng)相和固定相內(nèi)不同生物分子之間相互作用強(qiáng)度的差異來分離物質(zhì)。

親和層析常見的用途是純化重組蛋白。親和層析是從粗混合物中純化蛋白質(zhì)或核酸的較佳選擇。如果蛋白質(zhì)的分子量，疏水性，電荷等未知，親和色譜法仍可適用于這種情況。一個(gè)典型例子是嘗試分離具有特定活性的酶時(shí)，可以用與所選底物相似或相同的連接配體構(gòu)建親和柱。

親和柱——親和層析的應(yīng)用

抗原和利用抗原、之間高特異的親和力而進(jìn)行分離的方法又稱為親和層析。例如將抗原結(jié)合于親和層析基質(zhì)上，就可以從中分離其對應(yīng)的。在蛋白質(zhì)工程菌發(fā)酵液中所需蛋白質(zhì)的濃度通常較低，用離子交換、凝膠過濾等方法都難于進(jìn)行分離，而親和層析則是一種非常有效的方法。將所需蛋白質(zhì)作為抗原，經(jīng)動(dòng)物后制備，將與適當(dāng)基質(zhì)偶聯(lián)形成親和吸附劑，就可以對發(fā)酵液中的所需蛋白質(zhì)進(jìn)行分離純化。抗原、間親和力一般比較強(qiáng)，其解離常數(shù)為108－10?12M，所以洗脫時(shí)是比較困難的，通常需要較強(qiáng)烈的洗脫條件。可以采取適當(dāng)?shù)姆椒ㄈ绺淖兛乖⒎N類或使用類似物等來降低二者的親和力，以便于洗脫。

另外金黃色球菌蛋白A（ProteinA）能夠與球蛋白G（IgG）結(jié)合，可以用于分離各種IgG。