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發布時間:2021-10-22 01:56  
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酵母基因組DNA提取好方法
DNA提取主要是CTAB方法,其他的方法還有物理方式如玻璃珠法、超聲波法、研磨法、凍融法。化學方式如異硫CN酸胍法、堿裂解法。生物方式:酶法。根據核酸分離純化方式的不同有;硅質材料、陰離子交換樹脂等。
提取基因組DNA和細胞核DNA是不同的方法
提取細胞核要先把細胞破碎分離出細胞核,要在甘油或其他保護劑中進行
SDS十二烷基磺酸鈉:可破壞細胞膜、核膜,并使組織蛋白與DNA分離
CATB是一種抽提液,破壞細胞膜的~
DNA不溶于異丙1醇,異丙1醇可以析出DNA,產生白色絮狀沉淀,用槍頭挑出就可以了
植物DNA的CTAB提取法:
1 稱取新鮮葉片2-3g,剪碎放入研缽中,在液氮中研磨成粉末。
2 將粉末轉移到的加有7ml經預熱的1 5×CTAB提取緩沖液15ml離心管中,迅速混勻后置于65℃水浴中,溫育30min。
3 取出離心管,冷卻至室溫,加入氯1仿/異戊1醇(24:1),充分混勻,室溫下2300×g離心20min。
4 將上清轉移至另一新的15ml離心管中,加入1/10體積10%的CTAB和等體積的氯1仿/異戊1醇。充分混勻,2300×g離心20min。
5 轉移上清至另一新的15ml離心管中,加入等體積1%的CTAB沉淀緩沖液,輕輕搖晃至形成DNA絮狀沉淀。1000×g離心10min,使DNA沉淀于管底。
6 加入1 5-2ml的1mol/LNaCl及5μlRNase置于56℃水浴中過夜。待DNA完全溶解后,加2-3ml4℃預冷的95%的冰乙醇使DNA沉淀,挑出DNA,置于1 5ml離心管中,用70%乙醇清洗30min,用離心機甩5s,倒出70%乙醇,再用95%乙醇浸泡5min,倒出95%乙醇,在超凈工作臺上吹干。
7 將風干的DNA直接在4℃保存備用或溶于100μlTE溶液中于-20℃保存。
核酸檢測是確診新冠肺1炎的重要標準,而檢測流程中的每一個環節都是精細活,容不得半點馬虎,是與病毒的正面交鋒,核酸檢測是如何“識別”病毒的?
從樣本核對、取樣滅活、核酸提取、體系配制、上機擴增到zui后結果分析,核酸檢測過程復雜繁瑣,為了保證結果準確性需要一套嚴密流程,每一批樣本在實驗室里至少需要4到6個小時的篩查,對于出現異常的樣本耗時則更長,一般檢測呈陽性的樣本,會再次復核,一般都需要8到10個小時才能完成檢測報告。