您好,歡迎來到易龍商務網!
發布時間:2021-09-16 16:58  
【廣告】





熒光分光光度計測試注意事項
①樣品應盛在四面透光的石英比色皿(熒光池)中,如果是揮發性樣品應使用帶塞的熒光池。
②在熒光分析時,為了得到穩定且可靠的數據,一般需要開機預熱氙燈大約30min。如果儀器光源采用的是閃爍氙燈,預熱時間可以縮短到10min左右。對某些易感光、易分解的熒光物質,盡量采用長波長、低人射光強度及短時間光照。
③溫度變化可引起熒光強度的改變。通常降低溫度,有利于提高熒光量的子產率,熒光強度增大。溫度影響熒光強度的顯著程度因樣品而異,大部分熒光物質的熒光強度受溫度影響不大,測試溫度變化不超過±3℃,對測試結果幾乎無影響。
④當熒光物質是弱酸或弱堿時,溶液的pH對熒光強度有較大影響。因為弱酸或弱堿在不同酸度中,分子和離子的電離平衡會發生改變,而熒光物質的熒光強度會因其離解狀態發生改變。
⑤分子結構中存在π-π共軛的熒光物質在極性溶劑中,熒光效率顯著增強。溶液中表面活性劑的加入能夠顯著提高熒光強度。
⑥瑞利散射和拉曼散射是溶劑的兩種散射光,應注意不要誤把瑞利散射和拉曼散射光譜當做熒光光譜。瑞利散射光波長與激發光波長相同,拉曼散射與激發光波長不同,而熒光物質的熒光波長與激發光波長無關,因此可以通過選擇適當的激發波長將拉曼散射光與熒光分開。在測試時選擇合適的狹縫寬度,或者空白扣除,也可以對散射光的影響進行校正。
⑦熒光物質分子與溶液中其它物質分子之間作用導致熒光強度降低,常見的熒光猝滅劑,如鹵素離子、重金屬離子、硝基化物質、重氮化合物等。
⑧測試過程中注意不要肉眼盯著氙燈光源看,以防眼睛造成損傷。
⑨儀器房應注意經常通風,避免產生的臭氧在室內富集。
熒光光譜儀
根據波茲曼 (Boltzmann)分布,分子在室溫時基本上處于 電子能級的基態。當吸收了紫外-可見光后,基態分子中的電子只能躍遷到激發單重態的各個不同振動-轉動能級,根據自旋禁阻選律, 不能直接躍遷到激發三重態的各個振動-轉動能級。處于激發態的分子是不穩定的,通常以輻射躍遷和無輻射躍遷等方式釋放多余的能 量而返回至基態,發射熒光是其中的一條途徑。振動弛豫(vibrational relexation)是處于激發態各振動能級的分子通過與溶劑分子的碰攛而將部分振動能量傳遞給溶劑分子,其電子則返回到同一電子激發態的低振動能級的過程。由于能量不是以光輻射的形式放出,故振動弛豫屬于無輻射躍遷。振動弛豫只能在同一電子能級內進行,發生振動弛豫的時間約為 秒數量級。內部能量轉換( internal conversion)簡稱內轉換,是當兩個電子激發態之間的能量相差較小以致其振動能級有重疊時,受激分子常由高電子能級以無輻射方式轉移至低電子能級的過程。
熒光分析的特點
靈敏度高:熒光分析的特點是靈敏度高,通常情況下要比分光光度計的靈敏度高出2-3個數量級。
選擇性強:包括激發光譜和發射光譜,在鑒定物質時,通過選擇波長可以使分子熒光分析有多種選擇。
試樣量少和方法簡便。
能提供比較多的物理參數:如激發光譜、發射光譜、熒光強度、產率、熒光壽命、熒光偏振等參數。這些參數反映了分子的各種特性,并通過它們可以得到被檢測分子的更多信息。
熒光壽命
熒光壽命與物質所處微環境的極性、黏度等有關,可以通過熒光壽命分析直接了解所研究體系發生的變化。熒光現象多發生在納秒級,這正好是分子運動所發生的的時間尺度,因此利用熒光技術可以“看”到許多復雜的分子間作用過程,例如超分子體系中分子間的簇集、固液界面上吸附態高分子的構象重排、蛋白質結構的變化等。熒光壽命分析在光伏、法醫分析、生物分子、納米結構、點、光敏作用、鑭系元素、光動力等領域均有應用。
熒光壽命的測定技術有時間分辨單光計數技術(TCSPC)、相調法、閃頻法。其中TCSPC具有靈敏度高、測定結果準確、系統誤差小的優點,是目前的的熒光壽命測定方法。