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              發(fā)布時間:2021-10-11 09:14  

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              終止液(3M H2SO4):蒸餾水178.3ml,逐滴加入(98%)21.7ml。(5) 底物緩沖液(PH5.0磷酸棗檸檬酸):0.2MNa2HPO4(28.4克/L)25.7ml0.1M檸檬酸(19.2克/L)  24.3ml加蒸餾水50ml。(6) TMB(四)使用液:TMB(10mg/5ml無水乙醇)0.5ml底物緩沖液(PH5.5)  10ml0.75%H2O2   32μl(7) ABTS使用液:ABTS 0.5mg底物緩沖液(PH5.5)  1ml3%H2O2   2μl(8) 抗原、和酶標記。(9) 正常人和陽性對照。



              酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應(yīng)注意防護。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應(yīng)加入強酸或強堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入。



              SOD Assay Kit-WST&reg;使用了Dojindo自己發(fā)明的易溶于水的唑鹽:WST&reg;-1(2-(4-碘)-3-(4-基)-5-(2,4-二磺酸)-2氫-四唑鹽,二鈉鹽),能夠和超氧陰離子反應(yīng)生成水溶性的染料,因此可以簡便地進行SOD的檢測。WST&reg;-1與超氧陰離子反應(yīng)的劇烈程度比cytochrome C小70倍;因此,它的檢測靈敏度非常高,并且能夠通過將樣品用buffer稀釋,使背景的吸光度化。



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