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發布時間:2021-06-27 07:55  
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熒光分光光度計基本原理
由氙燈發出的紫外光和藍紫光經濾光片照射到樣品池中,激發樣品中的熒光物質發出熒光,熒光經過濾過和反射后,被光電倍增管所接受,然后以圖或數字的形式顯示出來。物質熒光的產生是由在通常狀況下處于基態的物質分子吸收激發光后變為激發態, 這些處于激發態的分子是不穩定的,在返回基態的過程中將一部分的能量又以光的形式放出,從而產生熒光.不同物質由于分子結構的不同,其激發態能級的分布具有各自不同的特征,這種特征反映在熒光上表現為各種物質都有其特征熒光激發和發射光譜;,因此可以用熒光激發和發射光譜的不同來定性地進行物質的鑒定。在溶液中,當熒光物質的濃度較低時,其熒光強度與該物質的濃度通常有良好的正比關系,即IF=KC,利用這種關系可以進行熒光物質的定量分析,與紫外-可見分光光度法類似,熒光分析通常也采用標準曲線法進行。
熒光分光光度計是紫外嗎
熒光分光光度計不是紫外,這是兩個不同的概念。
紫外分光光度計檢測物質環境的要求較低。其應用波長范圍為200~400nm的紫外光區、400~850nm的可見光區。
熒光分光光度計檢測物質要求環境高,微量檢測,結果較準確,不但可以做一般的定量分析,而且還可以推斷分子在各種環境下的構象變化,從而闡明分子結構與功能之間的關系。在溶液中,當熒光物質的濃度較低時,其熒光強度與該物質的濃度通常有良好的正比關系,即IF=KC,利用這種關系可以進行熒光物質的定量分析,對被測物質要求高。相比較,熒光光度計較準確。
熒光光譜
熒光分析法的特點是靈敏度高,對某些物質的微量分析可以檢測到 克數量級,如污水中的銀含量用熒光分析法可以檢測到 克,可以檢測到 克。對一些亦可檢測到 克。熒光分析的靈敏度比分光光度法的靈敏度高2~3個數量級,這是由于熒光分析的熒光和入射光之間成直角,而不在一條直線上,所以是在黑背景下檢測熒光。而分光光度法的與入射光在一條直線上,所以它是在亮背景下檢測。因此熒光分析法比分光光譜法靈敏度高。分光光譜法的靈敏度一般只能檢測到 克,兩者相差三個數量級。當然熒光分析法比起帶電子顯微鏡的電子探針法靈敏度又低一些,然而電子探針儀器價格昂貴,使用不方便。
熒光分析的第二個特點是選擇性強,特別是對有機化合物而言。因熒光光譜既包括激發光譜又包括發射光譜,凡是能發射熒光的物質,必須首先吸收一定波長的紫外線,而吸收了紫外線后不一定就發射熒光。能發射熒光的物質,其熒光波長也不盡相同。如果即使熒光光譜相同的話,而它的激光光譜也不一定相同。反之如果它們的激發光譜相同,則可用發射光譜把它們區分開來,因此供選擇的余地是比較多的。所以熒光分析的選擇性很強。例如有兩種物質,它們的熒光光譜很相似,不易把它們分開。但它們的激光光譜不會相同,因此就可用掃描激光光譜把它們分開。如果用分光光譜法就難以辦到這一點,因為分光光譜只能得到待測物質的特征吸收光譜。所以分光光譜法的選擇性就沒有熒光分析法強。