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等溫核酸試劑盒

RPA的原理;

重組酶與引物結(jié)合形成的蛋白-DNA復(fù)合物，能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就會發(fā)生鏈交換反應(yīng)形成并啟動DNA合成，對模板上的目標(biāo)區(qū)域進行指數(shù)式擴增。被替換的DNA鏈與SSB結(jié)合，防止進一步替換。在這個體系中，由兩個相對的引物起始一個合成事件。整個過程進行得非常快，一般可在十分鐘之內(nèi)獲得可檢出水平的擴增產(chǎn)物。

近年來，等溫擴增方法的發(fā)展讓基因檢測得以擺脫熱循環(huán)儀器的使用，因此更加便捷化。基于等溫擴增方法，多種具有POCT潛力的SARS-CoV-2檢測技術(shù)得以開發(fā)出來。特別是結(jié)合CRISPR技術(shù)后，檢測的特異性和靈敏度得到了進一步提升。盡管如此，幾乎所有這些報道的技術(shù)僅僅證明了其在單基因檢測中的應(yīng)用。然而，臨床認(rèn)可的金標(biāo)準(zhǔn)方法，如RT-qPCR，通常需要檢測兩個基因。因為雙基因檢測能夠有效地避免因基因部分降解，基因拷貝數(shù)差異和擴增錯誤等引起的潛在假陰性結(jié)果。

核酸提取技術(shù)亦可分為2部分，<樣本裂解>與<核酸純化>，目前市面上常見的樣本裂解技術(shù)有<物理加熱裂解>、<蛋白酶K裂解>、<一步法核酸提取>，核酸純化技術(shù)有<梯度離心法>、<硅膠模柱法>、<磁珠法>。因此對于核酸提取技術(shù)的不同，樣本裂解及核酸純化環(huán)節(jié)不盡相同，操作繁瑣程度不同，提取效率、核酸的純度亦會不同。而復(fù)雜的操作更易導(dǎo)致氣溶膠污染，帶來風(fēng)險。因此，選擇合適的提取技術(shù)，對當(dāng)前疫情防控至關(guān)重要。