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發布時間:2021-07-18 07:31  






營養條件
1.培養基細胞培養基包含細胞生長所需的各種營養物質,包括碳水化合物、氨基酸、無機鹽、維生素等。針對不同細胞的營養需求,有多種合成培養基可供選擇,如EBSS、Eagle、MEM、RPMll640、DMEM等。
2.其他添加成分在各種合成培養基提供基礎營養物質之外,還需根據不同細胞和不同的培養目的添加其他成分,如血1清、因子等。
血1清提供的是細胞外基質、生長因子和轉鐵蛋白等重要物質,常用的是胎牛血1清。要根據不同的細胞和不同的研究目的決定添加血1清的比例。10%~20%的血1清能維持細胞較快的生長增殖速度,稱為生長培養液;為維持細胞緩慢生長或不死,添加2%~5%的血1清即可,稱為維持培養液。但血1清中也存在有害于細胞生長和繁殖的物質,如補體、免1疫球蛋白和一些生長抑制因子;成分不明確,影響對結果的分析;不同動物、不同批次的血1清活性差別較大,影響培養效果的穩定性。
谷氨酰胺是細胞生長重要的氮源,在細胞生長代謝過程中起重要作用,但由于谷氨酰胺在溶液中很不穩定容易降解,4℃下放置7天即可分解約50%,故谷氨酰胺需在使用前添加。
iPS細胞這一名詞,全稱為誘導性多能ips(induced pluripotent stem cell),縮寫名來源于各個英文單詞的首字母。
胚胎iPS的獲取,不可避免的要嚴重的傷害乃至殺1死胚胎,這在很多國家已經是法律上的殺1人罪行了。所以,胚胎iPS的相關研究在各國都受到嚴格監管,實質上陷于停頓,而iPS細胞就不存在這樣的倫1理問題,無需受精卵或胚胎,僅僅是提取一些體細胞,就可以將其轉化為與胚胎iPS相同的多能細胞,可謂是巨大的進步了。
細胞的鑒定
1. u表面標志分子鑒定iPS細胞能夠表達多能iPS細胞特異的表面標志分子,如:ssea-1(階段特異性胚胎抗原1),ssea-3等。這些物質在已分化體細胞表面不表達,從而鑒定。
2. u表觀遺傳狀態鑒定iPS細胞與ES細胞具有相似的DNA甲1基化模式和組蛋白修飾情況。iPS細胞中的多能基因,如oct-4,Nanong等的啟動子區域CpG島從高甲1基化轉變為類似ES細胞的低甲1基化狀態。
3.u基因表達模式和發育潛能鑒定d. uES和iPS細胞基因表達譜基本相同。iPS細胞具有發育為三個胚層的能力,并能參與生殖系的發育,這與ES細胞相同。iPS細胞的多能基因啟動子區域具有與ES細胞相同的高的H3K4Me3及低H3K27Me3水平。