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低溫生物菌種——菌種分離方法

組織分離法

先將所需的藥用真菌采集回來，選取新鮮、個體大、壯實、中齡及無病蟲害的子實體（或菌核、菌索），作為分離用的材料。若為子實體，取其菌蓋或菌柄組織；若為菌核，取其全部或部分（如茯苓）菌核；若為菌索，取其部分根狀菌索（如蜜環菌）。再用75 %酒精進行表面消毒2 分鐘，用無菌水（或冷開水）沖洗數次，洗凈殘留的藥液后切成小塊。，然后，放入PDA 培養基的試管或培養皿上，置24 ～26℃溫度下，培養5 ～ 7 天。在分離的真菌組織周圍見長有白色菌絲時，應及時將菌絲移至斜面試管培養基上，再置溫度24 ～26 ℃下培養7～10 天，即得純菌種。所得的純菌種還可繼續擴大培養或保藏。

生物有機肥產品生產使用現狀

細菌類生產用除常見的芽孢外， 還出現了高地芽孢菌、 類干酪乳菌、 屎腸球菌、 鹽居固氮菌等新， 其中， 高地芽孢菌和鹽居固氮菌普遍存在于土壤環境中， 未見致病性報道， 屬風險一級； 類干酪乳菌又名為副干酪乳菌， 雖為風險一級 ， 但有從動物受傷部位分離到該菌的報道；屎腸球菌屬于乳酸菌類，屬風險二級， 建議謹慎使用。伯克霍爾德氏菌是一些具有生物防治、 促進植物生長和生物修復等功能的細菌， 但同時也是可以引起鼻疽、 類鼻疽病的致病菌， 因此真菌伯克霍爾德氏菌屬于風險三級， 需做致病性試驗， 建議慎用或不用。真菌類生產用菌株主要為絲狀真菌和酵母菌。哈茨木霉、 米曲霉、 淡紫紫孢菌、 長枝木霉、 綠色木霉、 棘孢木霉、 黑曲霉、 粉紅螺旋聚孢霉、 金龜子綠僵菌等屬于生物安全風險等級二級， 需按照NY/T 1109－2017 《微生物肥料生物安全通用技術準則》 進行毒理學測試。酵母菌主要以釀酒酵母為主， 還有少量東方伊薩酵母、杰丁塞伯林德納氏酵母 （原產朊假絲酵母、 杰丁畢赤酵母）、 膜醭畢赤酵母、 解脂耶羅威亞酵母等， 屬于生物安全風險等級一級， 可免做毒理學試驗。

低溫生物菌種的工藝介紹

現有生化工藝有活性污泥法、生物接觸氧化、MBBR、MBR等，這些工藝在常溫下均可實現氨氮的有效去除并達標，這時好氧系統中占主導地位的是中溫（微生物）硝化菌，硝化菌分自養硝化細菌和異樣硝化菌。

自養硝化菌生長繁殖緩慢，在活性污泥系統中無法與異養細菌競爭，難以維持較高的細胞濃度，需要保持較長的污泥停留時間來取得較好的脫氮效果，易受外界環境影響，對環境沖擊尤其是毒物沖擊非常敏感，硝化系統很容易崩潰，要經常不斷的馴化和培養。