安徽實時定量pcr質粒構建 南京英瀚斯生物科技

免yi共沉淀（Co-IP檢測）是以抗ti和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的方法。當細胞在非變性條件下被裂解時，完整細胞內存在的許多蛋白質與蛋白質間的相互作用也被保留下來。不過該文庫構建時會進行片段化選擇從而濾掉了smallRNA的信息，所以需要另外再構建一個smallRNA文庫，進行測序分析后可以得到miRNA和其他smallRNA的鑒定及注釋信息。用預先固化在beads上的蛋白質A的抗ti免yi沉淀A蛋白，那么與A蛋白在體內結合的蛋白質B也能一起沉淀下來，再通過蛋白變性分離，對B蛋白進行檢測，進而證明兩者間的相互作用。

慢病毒包裝

1、細胞準備：細胞傳到后，密度達到70％左右時進行轉染；

2、細胞轉染:取兩個EP管，一個加入Opti-MEM、核心質粒和包裝質粒；另一個加入Opti-MEM、lipo2000，然后將兩管混勻；

3、細胞孵育：將混合液逐滴加入細胞培養皿中，混勻后孵育；

4、收集病毒：轉染后48h、72h收集含慢病毒的上清；

5、滴度檢測:細胞為30%－50％時加入病毒上清液，檢測陽性細胞比例。

動物組織細胞基因組DNA提取

操作步驟

1. 取新鮮或冰凍動物組織塊0.1g（0.5cm3），盡量剪碎。置于玻璃勻漿器中，加入1ml的細胞裂解緩沖液勻漿至不見組織塊，轉入1.5ml 離心管中，加入蛋白酶K

（500ug/ml）20μl，混勻。在65℃恒溫水浴鍋中水浴30min，也可轉入37℃水浴12～24h，間歇振蕩離心管數次。于臺式離心機以12000 rpm離心5min，取上清液入另

一離心管中。

2.加2倍體積異，倒轉混勻后，可以看見絲狀物，用100ul 吸頭挑出，涼干，用200ul TE 重新溶解。（可進行PCR反應等，需要進一步純化的按下列步驟進行）

3.加等量的酚??振蕩混勻，離心12000 rpm，5min。

4.取上層溶液至另一管，加入等體積的?，振蕩混勻，離心12000 rpm，5min。

5. 取上層溶液至另一管，加入1/2體積的7.5mol/L氨加入2倍體積的無水乙醇，混勻后室溫沉淀2min ，離心12000 rpm ,10min。

6.小心倒掉上清液，將離心管倒置于吸水紙上，將附于管壁的殘余液滴除掉。

7.用1ml 70%乙醇洗滌沉淀物1次，離心12000 rpm ， 5min。

8.小心倒掉上清液，將離心管倒置于吸水紙上，將附于管壁的殘余液滴除掉，室溫干燥。

9.加200ul TE重新溶解沉淀物，然后置于4℃或?C20℃保存備用。

10.吸取適量樣品于GeneQuant上檢測濃度和純度。

分子生物學檢測服務

隨著生命科學和化學的不斷發展，人們對生物體的認知已經逐漸深入到微觀水平。從單個的生物體到qi官到組織到細胞，再從細胞結構到核酸和蛋白的分子水平，人們意識到可以通過檢測分子水平的線性結構（如核酸序列），來橫向比較不同物種，同物種不同個體，同個體不同細胞或不同生理（病理）狀態的差異。這就為生物學和醫學的各個領域提供了技術平臺。分子生物學檢測技術是現代分子生物學與分子遺傳學取得進步的結晶，是在人們對基因的結構以及基因的表達和調控等生命本質問題的認識日益加深的基礎上產生的。于是,我們把位于染色體上某一區域的一組相關聯的SNP等位位點稱作單體型(haplotypeb大多數染色體區域只有少數幾個常見的單體型(每個具有至少5%的頻率),它們代表了一個群體中人與人之間的大部分多態性。近年來，分子生物學檢測技術的方法學研究取得了進展，先后建立了各種分子生物學檢測技術。