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固相萃取(Solid Phase Extraction，簡稱 SPE)是一種以液-固色譜分離為基礎的前處理技術，可對目標化合物進行選擇性吸附和選擇性洗脫。按保留機理，力主要分為無極力作用、極力作用、離子交換(靜電吸引)。

反相態是 SPE小柱中相對于流動相極性較低的分離態。本發明主要利用固定相官能團的碳氫鍵和目標化合物的碳氫鍵之間的非極性作用力，適合從極性基質中提取分離非極性和中極性的目標物。

對由非極性力吸附到反相 SPE柱上的目標物，可用弱極性溶劑，如氯1仿、環己1烷、乙1酸乙1酯等洗脫。只有當溶劑的洗脫強度足夠大時，才能使目標物與吸附劑之間的范德華力破壞，使目標物從 SPE柱洗脫。即使是極性更強的甲1醇，對許多化合物而言，也有足夠的非極性力量來洗脫它。有時候，單種溶劑無法徹底洗脫疏水性強的目標物，可以考慮使用二1氯甲1烷：乙1酸乙1酯(1:1，體積比)。

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正相填充(Silica,NH2, CN, Florisil, Diol, Carb,Alumina-N, A, B)

*分析物：中等極性至強極性

*基質：從非極性到中極性

·方法：

(a)激1活：非極性有機溶1劑(通常由上樣液所在的有機溶1劑激1活)

(b)洗脫：非極性有機溶1劑(一般是上樣液所在的有機溶1劑)

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在 pH和 pKa相同的情況下，[a]/[HA]為1。這就是說，此時50%弱酸性化合物是陰離子態，另50%為中性態。這種 pH環境下，即使這些呈陰離子狀態的化合物地被陰離子交換劑吸附，然后地洗脫，也只能得到50%的回收率。由于只有50%的弱酸化合物處于離子狀態，所以被陰離子交換劑吸附。因此，控制環境 pH值對于離子交換固相萃取非常重要。

較弱的酸性化合物離子化的程度越高，代表了較強的[A=/[HA]。從理論上講，當[A]/[HA]等于100時，99%的弱酸性化合物都是陰離子，并且能被陰離子交換劑吸附。按照式三，要使弱酸性化合物在陰離子固相萃取吸附時99%的離子化，樣品基質的 pH值應高于化合物 pKa至少兩個 pH單位。

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對污染的 HPLC柱進行再生的關鍵是要了解污染物的性質，并找出合適的溶劑。

若污染物是由于重復進樣時強保留物質的積累所致，則采用簡單的清洗步驟去除污染物后，通常可以恢復色譜特性。在色譜柱中，有時使用90~含量的溶劑 B (雙溶劑反相系統中較強的洗脫能力的溶劑，如甲i醇、乙晴、四氫呋i喃等)沖洗20個柱，可除去污染物(色譜柱的柱體積與空柱管體積概念不同，其柱體積為4.6x250mm，而柱2.1x150mm則為0.28 ml)。若采用緩沖鹽制，則不能直接轉換為強溶劑，而突然轉換為高濃度有i機溶劑，則可能造成 HPLC流動體系中緩沖鹽分沉淀，從而造成柱篩板堵塞、連接管堵塞、泵泄漏、活塞損壞或進樣閥轉軸失效等嚴重問題。應首先使用無緩沖鹽的流動相(即將緩沖液換成水)，沖洗5~10柱體積后再切換使用強溶劑清洗。

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聚乙烯醇小柱活化平衡的目的有二，一是使官能團填料的粘附性和伸縮性保持對目標化合物的大吸附活性，另一種目的是去除填料本身可能引入的雜質。硅膠鍵合C18，是一種在硅膠微球表面粘結的疏水性C18官能團，為使其對目標物保持充分吸附活性，需要在濕潤環境上樣物在填料表層形成的液膜(活化平衡)與上樣物的溶劑分子具有良好的相容性，目標物在膜間進行傳質，與膠接C18發生疏水作用時，目標物與膠接C18本身并不具有水浸潤性，直接上樣物，C18蜷縮，而較強的疏水性則使其難以與目標物中的目標物分子充分接觸，因此， HLB小柱采用聚合物改性材料，增加了親水基團，使其在上樣物的環境中與目標物分子充分接觸，而發生傳質，使目標物在上樣物的環境中完全保留。

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反相萃取通常用于化合物的預處理，正如反相色譜是色譜中常用的分離方法一樣，反相萃取中的淋洗液通常是一種水相或含水的緩沖溶液，除去水分后，可方便地進行干燥、濃縮。

有些項目，在淋洗步驟完成后，直接用一定量的洗脫液，如1 ml洗脫，這個過程中洗脫和定容集是一步處理，前一步處理必然會影響洗脫步驟的定量結果。

也就是溶劑互溶問題，當淋洗過程中使用的溶劑極性與洗脫溶劑極性的差別較大時，就會產化分層，洗脫阻力大，洗脫液容易被稀釋等問題，造成洗脫效果不同，從而導致試驗結果。

固相萃取小柱 SPE工藝的基本步驟：

上樣：將預處理過的樣品倒入活化的 SPE小柱中，然后采用加壓、抽真空或離心等方法，使液體樣品在 SPE小柱中以適當速度流過。淋洗：選擇強度適中的混合溶劑，在可能情況下清洗去除干擾組分，而不會導致目標萃取物流喪失；洗脫：用小體積的適當洗脫溶劑洗脫和收集分析物；將干燥溶劑備用或直接在線分析。

洗脫劑的強度選擇非常重要，要達到分析物盡可能地被洗脫而吸附比分析物強的雜質仍然留在 SPE小柱上而不被洗脫的效果。

選用 SPE柱規格的原則是，首先要確保 SPE柱的填料具有足夠的容量，以便將目標化合物100%保留在柱體上。另外，填料也不易過量。

填充物越多，溶劑對目標化合物的洗脫效果就越好。所以在選擇 SPE柱規格時，一定要考慮 SPE柱的容量。柱容是指一單位質量的填料以主要力保持其質量。

鍵合型硅膠柱容量一般為1%~5%。例如， SPE柱的填料為100 mg，其大容量一般不超過5 mg。該離子交換劑柱容量約為0.5~1.5 meq/g。