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發布時間:2021-03-23 19:40  
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廣州碩譜生物科技有限公司SPE專用柱批發
SPE小柱保留雜質固相萃取操作一般有三步:
1)、活化--除去柱子內的雜質并創造一定的溶劑環境(注意整個過程不要使小柱干涸)。
2)、上樣--將樣品轉移入柱,此時大部分目標化合物會隨樣品基液流出,雜質被保留在柱上,故此步驟要開始收集(注意流速不要過快)。
洗脫---用小體積的溶劑將組分淋洗下來并收集,合并收集液(注意流速不要過快).
淋洗通常需要干燥,原因是什么?
回答:淋洗液一般都要干燥,主要考慮以下因素:
1.通常因為反相萃取用于化合物的預處理,正如反相萃取在色譜中是一種常見的分離方法,反相萃取中的淋洗液通常是一種水相或含水的緩沖溶液,除去水分,從而便于后續的干燥、濃縮步驟。
2.有些項目,在淋洗步驟完成后,直接用一定量的洗脫液,如1 ml甲1醇洗脫,這個過程將洗脫和定容集進行一步處理,前者的處理必然會對洗脫步驟的定量結果產
三、就是溶劑互溶問題,當淋洗過程中使用的溶劑的極性與洗脫溶劑的極性相差很大時,就會產生1乳化分層,洗脫阻力大,洗脫液有被稀釋的危險等,從而導致洗脫效果不同,從而導致試驗結果的失敗。
色譜柱保存
反相色譜柱,保存溶劑通常是含至少30% 有機相的水溶液,也可在常規清洗后直接保存在有機相中。
如果需要長時間儲藏,則需要使用較高比例的有機相(有機相比例至少大于50%)
固相萃取知識
要有效地利用離子交換機理將目標化合物吸附在SPE柱上,必須滿足以下兩個條件:
(1)目標化合物離子與吸附劑官能團的離子態帶相反電荷;
(2)萃取環境的pH必須同時使目標化合物和吸附劑上的官能團帶電荷;
(3)萃取環境不能含有高濃度的帶有和目標化合物相同電荷的競爭化合物。
在實際操作中,為了滿足前兩個條件,確保99%以上的目標化合物及固相萃取吸附劑上的官能團能夠呈離子態或呈中性狀態,應該根據目標化合物及固相萃取吸附劑官能團的pKa來調節樣品或SPE柱的pH。
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淋洗液需要抽干的原因主要有兩個:
1一般淋洗液與洗脫液的極性差異會很大(如淋洗液為水,洗脫溶劑為正己烷或二氯甲i烷),兩種溶劑不能互溶或溶解,從而造成洗脫液流不下或流速慢,妨礙洗脫溶劑與目標物接觸,洗脫效果差,回收率低。
2淋洗液如果是水,不進行抽干,就會有一部分被收集到洗脫液中,洗脫液如果進行氮吹,則含水的洗脫液也很難吹干,如果進行長時間的氮吹,就會導致少量的水溶液被吹干,出現回收率偏低的情況,因此淋洗后就需要進行抽干操作。
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固相萃取的基本原理:
離子作用力
離子作用力發生在帶相反電荷的目標物與固相萃取填料之間,在離子交換固相萃取中,樣品基質可以是極性,也可以是非極性,但是離子交換的選擇性是作用力中zui好的。