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生物有機肥產品生產菌種安全性分析

雖然目前生物有機肥產品生產菌種大多采用植物根際促生菌， 但近年來很多研究發現，芽孢菌屬和類芽孢菌個別菌株能產生菌素。 即便在菌種安全分級目錄中列為一級免做理學試驗的菌種， 如枯草芽孢菌、 多類芽孢菌、 地衣芽孢菌等個別菌株也檢測到部分溶血素基因， 潛在危害不容忽視。 因此， 開展生物有機肥產品生產菌種生物安全風險評價， 從源頭上把好菌種安全關是產品質量安全的首要保障。通過調研發現， 用于生物有機肥產品的部分生產菌種分類地位不明確， 甚至混亂， 難以從源頭上進行安全風險的初步識別 。 以常見生產菌種枯草芽孢菌為例， 實際上是一個表型相似的群體， 包括枯草芽孢菌、 地衣芽孢菌、 短小芽孢菌、解淀粉芽孢菌、 深褐 （萎縮） 芽孢菌、莫哈韋（莫杰夫） 芽孢菌、 死谷芽孢菌、 索諾拉沙漠芽孢菌、 特基拉芽孢菌、暹羅芽孢菌等 10個緣種。生產企業送檢的枯草芽孢菌生物有機肥產品， 經鑒定發現很多產品實際為解淀粉芽孢菌， 且許多菌株具有很強的溶血作用。通過對生產企業調研發現， 部分生產企業選擇分離于動物腸道的解淀粉芽孢菌作為產品生產用菌株， 該類菌種生產發酵周期短、 活菌數量高、 生產成本低， 但產品的應用功效不佳， 溶血風險大 ， 建議慎用。而植物來源的解淀粉芽孢菌溶血風險小， 產品應用效果好， 推薦使用。

                                                            低溫生物菌種的脫水存法

③ 石蠟油封存法，在斜面菌種培養物上,倒上滅菌后的石蠟油，高出斜面1cm，于4℃冰箱或低溫干燥處保存，此法不適用于能利用石蠟油作碳源的微生物，保存期為一年以上。

                                                           低溫生物菌種的控溫方法

1.程序控溫降溫法，應用電子計算機程序控制降溫裝置，可以穩定連續降溫，能很好地控制降溫速率。

從液氮罐中取出安瓿管或塑料凍存管，應立即放置在38℃-40℃水浴中快速復蘇并適當搖動。直到內部結冰全部溶解為止，一般約需50秒-100秒。開啟安瓿管或塑料凍存管，將內容物移至適宜的培養基上進行培養。

低溫生物菌種純化方法

1、傾注平板法

首先把微生物懸液通過一系列稀釋，取一定量的稀釋液與熔化好的保持在40~50°左右的營養瓊脂培養基充分混合，然后把這混合液傾注到無菌的培養皿中，待凝固之后，把這平板倒置在恒箱中培養。單一細胞經過多次增殖后形成一個菌落，取單個菌落制成懸液，重復上述步驟數次，便可得到純培養物 2、涂布平板法

首先把微生物懸液通過適當的稀釋，取一定量的稀釋液放在無菌的已經凝固的營養瓊脂平板上，然后用無菌的玻璃刀把稀釋液均勻地涂布在培養基表面上，經恒溫培養便可以得到單個菌落。3、平板劃線法

簡單的分離微生物的方法是平板劃線法。用無菌的接種環取培養物少許在平板上進行劃線。劃線的方法很多，常見的比較容易出現單個菌落的劃線方法有斜線法、曲線法、方格法、四格法等。當接種環在培養基表面上往后移動時，接種環上的菌液逐漸稀釋，然后在所劃的線上分散著單個細胞，經培養，每一個細胞長成一個菌落。

2、富集培養法

富集培養法的方法和原理非常簡單。我們可以創造一些條件只讓所需的微生物生長，在這些條件下，所需要的微生物能有效地與其他微生物進行競爭，在生長能力方面遠遠超過其他微生物。所創造的條件包括選擇合適的碳源、能源、溫度、光、pH、滲透壓和氫受體等。在相同的培養基和培養條件下，經過多次重復移種，然后富集的菌株很容易在固體培養基上長出單菌落。如果要分離一些專性寄生菌，就必須把樣品接種到相應敏感宿主細胞群體中，使其大量生長。通過多次重復移種便可以得到純的寄生菌。