臨床前動物實驗常規及特殊染色「英瀚斯」

實驗步驟

1、實驗之前，一定要確保高架十字迷宮整個裝置的清潔。這個步驟不僅僅是要求當天的實驗，更加側重于每一次動物實驗完成后的清潔除味工作，一定要去除上一只動物在宮體內遺留下來的尿液、糞便等，盡可能創造一個清潔、無味道的理想試驗環境。同時，實驗員需要記錄動物的編號、日期、狀態等信息；實驗動物提前運送到行為學實驗室臨時籠架 ,

適應環境至少3H左右, 減少動物緊張。

2、將實驗動物（大鼠或者小鼠）從飼養籠中取出，實驗動物盡量背向實驗員，將動物輕輕放在儀器宮體的中央區域，動物面向開臂，然后實驗員迅速安靜的離開；

3、打開SuperMaze或者VisuTrack動物行為分析軟件，跟蹤動物在高架十字迷宮儀器內的軌跡運動，自動計算指標，通常實驗時長為5min；

4、實驗結束后，取出實驗動物，放入飼養籠，做好實驗完成動物的標記信息，同時，用酒精和紙巾清潔迷宮。

高架十字迷宮試驗 ：

EPM ) 既可以建立焦躁應激的模型也是國際上公認的經典測量焦躁反應的方法。其原理是利用動物對新異環境的探究特性和對高懸敞開臂的恐 懼心理, 形成動物的矛盾沖突來考察大鼠的焦躁狀態。 EPM 測試的項目中, 焦躁動物的 OE% 和 OT% 會明顯降低, 經典抗焦躁藥則使兩者升高, OE CE 反映了動物的運動活性。本研究發現模型組大鼠的 OE% 和 OT% 顯著下降, 運動活性也降低。HD反映了動物在非保護區內的探索行為, 代表動物對陌生環境的好奇探究或因恐懼而尋求逃避, 與焦躁程度有一定相關性, 本研究中空瓶應激后的大鼠 HD行為減少; RR可用來觀察藥有無鎮靜作用及鎮靜強度。上述結果證實, 慢性應激后的大鼠明顯處于焦躁狀態, 說明慢性焦躁應激大鼠模型的制備成功, 且通過量化的標準客觀反映出大鼠的焦l慮程度。

在各種致病因素作用下，大腦實質受到損傷后可出現神經功能改變，如偏癱、平衡失調等。

對于神經系統疾病動物模型而言，造模結束只是步，驗證個體模型是否成功是第二步，而控制組內個體特征一致性是第三步。

采用神經功能評分是重要的觀察指標，可以用來在體評價模型是否成功或者病變嚴重程度。盡量控制動物模型的評分一致性是很困難但不得不做的一件事。

這里介紹三種常見的嚙齒類神經功能評分方法。

一、【Longa評分法】

① 無神經功能缺陷：0分；

②癱瘓側前爪不能完全伸展：1分；

③行走時向癱瘓側轉圈：2分；

④行走時向癱瘓側傾倒：3分；

⑤不能自動行走，存在意識喪失現象：4分。

二、【Bederson評分法】

抓起動物的尾巴，使動物離臺面10cm高。此時，正常大鼠的前爪處于伸直狀態，而存在神經功能病變的動物則可出現如下表現：

②動物尾巴提起后，癱瘓側前肢回收并屈于腹下，而正常側肢體伸向臺面：1分；

③除第二條表現以外，俯臥于臺面時向癱瘓側側推動物的阻力較正常側明顯降低：2分；

④除條和第二條以外，動物行走時向癱瘓側旋轉：3分。

三、【平衡木評分法】

一根長為80cm、寬為2.5cm的木條，水平固定在離臺面10cm高度的地方，然后讓動物在木條上行走。

①能跳上平衡木條，可以自由行走但不跌倒：0分；

②能跳上平衡木條，動物在上面行走會跌下，但跌下的機會小于50%：1分；

③能跳上平衡木條，動物在上面行走會跌下，但跌下的機會大于50%：2分；

④動物在正常側身體的幫助下可以跳上平衡木條；但是癱瘓側的后肢不能夠幫助身體向前移動：3分；

⑤動物無法在平衡木條上行走，但是可以坐在木條上：4分；

⑥將動物放在木條上，動物很快會掉落下來：5分。