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發布時間:2021-10-01 21:21  
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RPA技術主要依賴于三種酶:能結合單鏈核酸(寡核苷酸引物)的重組酶、單鏈 DNA結合蛋白(SSB)和鏈置換DNA聚合酶。這三種酶的混合物在常溫下也有活性,反應溫度在37°C左右。
重組酶與引物結合形成的蛋白-DNA復合物,能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列,就會發生鏈交換反應形成并啟動 DNA合成,對模板上的目標區域進行指數式擴增。被替換的 DNA鏈與SSB結合,防止進一步替換。在這個體系中,由兩個相對的引物起始一個合成事件。
數字PCR作為新定量技術,主要采用當前分析化學熱門研究領域的微流控或微滴化方法,借助專門設備將50微升左右核酸溶液樣本大量稀釋后,分割成了近10萬個液滴分散至芯片的微反應器或微滴中,單一液滴為獨立反應單元,每個反應器的核酸模板數少于或者等于1個。