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發(fā)布時(shí)間：2021-10-04 19:04
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實(shí)驗(yàn)室級(jí)別的制備液相色譜主要用于以下領(lǐng)域
1.天然藥品化學(xué)、中藥化學(xué)。這是國(guó)內(nèi)目前廣泛的使用方法，為了弄清楚植物中的微量有效成分，開(kāi)放手工色譜柱早已不夠用了，幾乎每個(gè)搞天然藥化的實(shí)驗(yàn)室都至少有一臺(tái)液相，土豪實(shí)驗(yàn)室人手一臺(tái)液相。
2.蛋白純化。相對(duì)于前者，蛋白純化的起步要稍微晚一點(diǎn)，但是發(fā)展很迅速。同時(shí)，由于外國(guó)儀器廠家在這個(gè)領(lǐng)域的優(yōu)勢(shì)不算太大，目前國(guó)內(nèi)也在這個(gè)領(lǐng)域加快發(fā)展，搶占地盤。
3.藥品雜質(zhì)純化。由于合成工藝并不能做到100%的產(chǎn)率，往往伴有副產(chǎn)品，如何獲得微量的雜質(zhì)并確定結(jié)構(gòu)和含量，這就得靠液相色譜。
4.手性化合物的制備。這個(gè)主要是有機(jī)合成和方法學(xué)的在用。
液相色譜的發(fā)展變化介紹
液相色譜色譜法按分離機(jī)制的不同分為液固吸附色譜法、液液分配色譜法（正相與反相）、離子交換色譜法、離子對(duì)色譜法及分子排阻色譜法。 液相色譜的發(fā)展，涉及鍵合相，基于被測(cè)物質(zhì)在固定相（含液體）和流動(dòng)相之間的相對(duì)溶解度的差異，通過(guò)溶質(zhì)在兩相之間進(jìn)行分配以實(shí)現(xiàn)分離。將固定液機(jī)械地涂漬在擔(dān)體上組成固定相。化學(xué)鍵合固定相。這種固定相是通過(guò)化學(xué)反應(yīng)把各種不同的有機(jī)基團(tuán)鍵合到硅膠（載體）表面的游離羥基上，代替機(jī)械涂漬的液體固定相。這不僅避免了液體固定相流失的困擾，還大大改善了固定相的功能，提高了分離的選擇性，化學(xué)鍵合色譜適用于分離幾乎所有類型的化合物。
液相色譜儀分類
液相色譜儀依據(jù)樣品在固定相和流動(dòng)相分離過(guò)程的物理化學(xué)原理，可分為以下五種。
1、吸附色譜：
用固體吸附劑作固定相，以不同極性溶劑作流動(dòng)相，依據(jù)樣品中各組分在吸附劑上吸附性能的差別來(lái)實(shí)現(xiàn)分離。
2、分配色譜：
用載帶在固相基體上的固定液作固定相，以不同極性溶質(zhì)作流動(dòng)相，依據(jù)樣品中各組分在固定液上分配性能的差別來(lái)實(shí)現(xiàn)分離。根據(jù)固定相和液體流動(dòng)相相對(duì)極性的差別，又可分為正相分配色譜和反相分配色譜。當(dāng)固定相的極性大于流動(dòng)相的極性時(shí)，可稱為正相分配色譜或簡(jiǎn)稱正相色譜;若固定相的極性小于流動(dòng)相的極性時(shí)，可稱為反相分配色譜或簡(jiǎn)稱反相色譜。
3、離子色譜：
用微粒離子交換劑作固定相，以具有一定pH值的緩沖溶液作流動(dòng)相，依據(jù)離子型化合物中各離子組分與離子交換劑上表面帶電荷基團(tuán)進(jìn)行可逆性離子交換能力的差別而實(shí)現(xiàn)分離。
4、體積排阻色譜：
用化學(xué)惰性的多孔性凝膠作固定相，按固定相對(duì)樣品中各組分分子體積排阻滯作用的差別來(lái)實(shí)現(xiàn)分離。以水溶液作流動(dòng)相的體積排阻色譜柱，稱為凝膠過(guò)濾色譜;以有作流動(dòng)相的體積排阻色譜法，稱為凝膠滲透色譜法。
5、親和色譜：
以在不同基體上，鍵合多種不同特性的配位體作固定相，用具有不同pH值的緩沖溶液作流動(dòng)相，依據(jù)生物分子與基體上鍵聯(lián)的配位體之間存在特異性親和作用能力的差別，而實(shí)現(xiàn)對(duì)具有生物活性的生物分子的分離。
制備液相色譜特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)
高壓—壓力可達(dá)150~300Kg/cm2。色譜柱每米降的壓為75 Kg/cm2以上。
高速—流速為0.1~10.0 ml/min。
高效—可達(dá)5000塔板每米。在一根柱中同時(shí)分離成份可達(dá)100種。
高靈敏度—紫外檢測(cè)器靈敏度可達(dá)0.01ng。同時(shí)消耗樣品少。
HPLC與經(jīng)典液相色譜相比有以下優(yōu)點(diǎn)：
速度快—通常分析一個(gè)樣品在15~30 min，有些樣品甚至在5 min內(nèi)即可完成。
分辨率高—可選擇固定相和流動(dòng)相以達(dá)到較好分離效果。
靈敏度高—紫外檢測(cè)器可達(dá)0.01ng，熒光和電化學(xué)檢測(cè)器可達(dá)0.1pg。
柱子可反復(fù)使用—用一根色譜柱可分離不同的化合物。
樣品量少，容易回收—樣品經(jīng)過(guò)色譜柱后不被破壞，可以收集單一組分或做制備。
