北京液相色譜高性價比的選擇

反相色譜影響因素(1)柱長有機小分子和肽類的分辨率隨柱長的增加而增加．但是柱長增加并不能使蛋白質和核酸等生物大分子的分辨率顯著增加．它們在較短的柱子上往往也有很好的分離效果。(2)流動相的流速。有機小分子和肽類的分辨率對流動相流速非常敏感。(3)固定相的選擇硅膠、鍵合固定相(如C18)、離子交換樹脂、聚酰胺、氧化鋁、凝膠等都可以作為色譜柱的填料。而蛋白質和核酸等生物大分子的分辨率則不然。流速越小，柱子越長，色譜峰的寬度就越大，分辨率就越小。制備色譜上樣過程中的流速對動態吸附容量影響很大。(3)溫度。溫度上升，流動相黏度下降，流動速度加快，且流動相與固定相之間的傳質速度加快，使分辨率增加。同時，溫度上升，分子熱運動增加，疏水性作用減弱。升高溫度要考慮目標物質的熱穩定性。(4)流動相組成。流動相的極性越大，溶質的分配系數越大，洗脫時間越長。RPC多采用降低流動相極性(水含量)的線性梯度洗脫法。水是極性強的溶劑，在反相色譜中常常和基礎溶劑配合使用，向流動相中加入不同濃度的、可以與水混溶的有機溶1劑，以得到不同強度的流動相，這些有機溶1劑稱為修飾劑。反相色譜中的有機溶1劑。此外，乙醇、四氫呋1喃、異丙1醇及二氧六環也常被用作修飾劑。有機溶1劑梯度的大小也會影響分辨率，一般梯度越小，分辨率越大。

反相色譜中樣品的保留值主要由固定相比表面積、鍵合相種類和濃度決定，保留值通常隨鏈長增長或鍵合相的疏水性增強而增大．對于非極性化合物通常遵循以下規則：(弱)非鍵合硅膠《基<C1(TMS)<C3<C4<<C8≈C18(強)。溶質保留值與固定相表面積成正比，普通載體(80 A°)的比表面積約為250 m2/g，而300A°孔徑載體的比表面積約為60 m2/g。但是從我們長期使用的實際效果來說，只要能保證水的質量，這一步完全可以也應當去除。當其他條件相同時，溶質在300A°孔徑(低表面積)色譜柱上的保留值大約為80A°孔徑色譜柱上保留值的1/4(60：250)，小孔隙柱如高保留的C18柱或石墨柱有利于強親水性樣品洗脫。樣品的保留值也可以通過改變流動相組成或溶劑強度來調整，溶劑強度取決于的性質和其在流動相中的濃度。在反相色譜中，采用高溶劑強度、低極性的流動相時可獲得較低的保留值。固定相的不同也可以導致選擇性發生變化，基柱、柱、C8柱、C18柱等的選擇性有很大差異，一般應優先考慮C8柱、C18柱，然后是基柱，再次是柱。據統計，近80%的有機物及無機物可以用液相色譜法進行分離．其中反相色譜中的C18柱是液相色譜中為常用的一類色譜柱。

液相色譜儀在使用過程中難免會接觸到腐蝕性的物質。這些腐蝕性物質不論是氣體、液體還是固體，都有可能損壞儀器的材料和零部件，降低色譜儀的使用壽命。在使用時要盡量避免這種情況的出現。     液相色譜儀流動相類型有多種，流動相性質對樣品的分離影響很大。

液相色譜儀流動相類型：     1、按組成可分：單組分流動相和多組分流動相。根據其分離原理，有吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜與排阻色譜等方法。     2、按極性可分：極性流動相、弱極性流動相和非極性流動相。     3、按作用可分：底劑和洗脫劑。     4、按使用方式可分：等度流動相和梯度流動相。     5、按用途可分：己烷、乙1酸乙1酯、乙醇、乙1腈和水等。     采用二元或多元組合溶劑作為流動相，可以靈活調節流動相的極性和增加選擇性，改進分離和調整出峰時間。

低壓色譜（LPLC）柱壓一般低于5bar（或75psi）。洗脫除另有規定外，通常按流動相洗脫能力大小，遞增變換流動相的品種和比例，分別分部收集流出液，至流出液中所含成分顯著減少或不再含有時，再改變流動相的品種和比例。 低壓色譜一般是由蠕動泵、進樣閥和檢測器組成，可以連續化，實現自動的梯度淋洗和餾分收集等操作。色譜柱管一般是玻璃或聚合物材料的，長度一般為240-440mm，內徑為10-40mm。 對于大多數在紫外區有吸收的物質，光學檢測器很常用。填料一般使用軟質的葡聚糖、瓊脂糖、纖維素、合成高聚物或離子交換劑，粒徑一般為40-60μm。