生豬屠宰場熒光定量PCR誠信企業「在線咨詢」

廣州勱博儀器有限公司產品服務包括：非洲病毒檢測、核酸提取純化、PCR、熒光定量PCR、檢測、非洲檢測、全自動核酸提取純化系統、病毒核酸提取系統、非洲病毒快速檢測試劑盒。我們的客戶對象是食品企業/公司/廠、食品加工企業/公司/廠、冷凍食品加工企業/公司/廠、養殖場、養豬場、屠宰場、生豬屠宰場。實時熒光定量PCR(real-timequantitativePCR,RQPCR)技術實現了PCR從定性到定量的飛躍,它以其特異性強、靈敏度高、重復性好、定量準確、速度快、全封閉反應等優點成為分子生物學研究中的重要工具。

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據介紹，該發明公開了一種非洲病毒 CP530R 基因的熒光 PCR 檢測試劑及其制備方法與用途，設計合成了一套特異性的引物及 Taqman 探針和陽性對照，并利用該引物及探針建立了一種快速簡便、特異性強、靈敏度高的熒光 PCR 檢測體系，可在 3～4 小時內從被檢樣本中快速、準確、特異、安全、簡便地檢出 ASFV CP530R 基因，可用于來自家豬、和軟蜱的各種樣本中微量非洲病毒CP530R 基因的檢測。專門的熱循環儀配備熒光檢測模塊，用于監測擴增時的熒光，檢測到的熒光信號反映了每個循環擴增產物的量。

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非洲 ( ASF ) 是由非洲病毒 ( ASFV ) 引起豬的一種急性、熱性、高度接觸性傳i染病。從 20 世紀 60 和 70 年代i開始 ASF 由非洲蔓延至歐美地區，2007 年格魯吉亞、亞美尼亞、阿塞拜疆和俄羅斯都出現了大面積流行，2018年8月也開始在我國快速蔓延開來，對我國養豬業的持續穩定發展構成巨大威脅。PCR擴增時，Taq酶的5’端－3’端外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監測系統可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現了熒光信號的累積與PCR產物形成完全同步。因此，本方法為快速診斷非洲病毒，提供了有力的技術手段。

廣州勱博儀器有限公司產品服務包括：非洲病毒檢測、核酸提取純化、PCR、熒光定量PCR、檢測、非洲檢測、全自動核酸提取純化系統、病毒核酸提取系統、非洲病毒快速檢測試劑盒。我們的客戶對象是食品企業/公司/廠、食品加工企業/公司/廠、冷凍食品加工企業/公司/廠、養殖場、養豬場、屠宰場、生豬屠宰場。②操作簡單、用時短，整個提取流程只有四步，大多可以在36-40分鐘內完成。

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在PCR擴增中，溶液中的模板變性后低溫退火時，引物與探針同時與模板結合。在引物的介導下，沿模板向前延伸至探針結合處，發生鏈的置換，Taq酶的5′-3′外切酶活性（此活性是雙鏈特異性的，游離的單鏈探針不受影響）將探針5′端連接的熒光基團從探針上切割下來，游離于反應體系中，從而脫離3′端熒光淬滅基團的屏蔽，接受光刺激發出熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現了熒光信號的累積與PCR產物形成完全同步。在real-time技術的發展過程中，兩個重要的發現起著關鍵的作用：（1）在90年代早期，TaqDNA多聚酶的5′核酸外切酶活性的發現，它能降解特異性熒光記探針，因此使得間接的檢測PCR產物成為可能。

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直接的方法指的是標記熒光的探針與擴增產物結合后即直接產生熒光，分子信標（molecular beacon）就屬于這一類，它本質上是一種標記熒光的發夾探針，當探針分子呈發夾結構時，結合在其兩端的熒光基團距離上接近，使得產生能量轉移效應，而不發生熒光。當互補序列出現時，探針與DNA雜交，探針轉變成一個開放的結構，呈線性，報告熒光基團與淬滅熒光基團彼此在空間上產生足夠的分離，熒光基團脫離了淬滅基團的影響，從而產生可被檢測到的熒光。廣州勱博--屠宰場熒光定量PCR磁珠法核酸提取，具有傳統DNA提取方法無法比擬的優勢，主要體現在：①能夠實現自動化、大批量操作，符合生物學高通量的操作要求，使得傳i染性疾病爆發時能夠進行快速及時的應對，這一特點使得傳統方法望塵莫及。

廣州勱博儀器有限公司產品服務包括：非洲病毒檢測、核酸提取純化、PCR、熒光定量PCR、檢測、非洲檢測、全自動核酸提取純化系統、病毒核酸提取系統、非洲病毒快速檢測試劑盒。我們的客戶對象是食品企業/公司/廠、食品加工企業/公司/廠、冷凍食品加工企業/公司/廠、養殖場、養豬場、屠宰場、生豬屠宰場。盡管如此我們也應清晰認識到，FQ-PCR技術在我國各個研究領域的應用并不多見，這就需要我國學者迎頭趕上，使FQ-PCR技術更充分地i推廣，以推動研究工作的快速發展。

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相對常規PCR而言，熒光定量PCR的主要優點是準確地確定初始模板拷貝數和寬的動態范圍內和高的靈敏度。熒光定量PCR結果可以用于定性（判斷一段序列的有無），也可以用于定量（確定DNA拷貝數），即qPCR，而常規PCR只能做半定量。另外，熒光定量PCR的結果無需通過瓊脂糖凝膠電泳來評估，大大節省實驗時間，提高實驗效率。還有的在入舍消毒池中，只是例行把水和火堿放進去，也不攪拌，火堿靠自身溶解需要較長時間，那剛放好的消毒水的作用就不確實了。還有，由于PCR反應和檢測都在反應管中進行，樣品污染的幾率大大降低，無需擴增后的實驗操作。

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簡單的講PCR技術早是用于擴增一段特異的PCR片段，用于克i隆、測序等實驗，后來也將其用于樣本中特異的PCR片段有無或相對定量，而熒光定量PCR技術則是為了測定樣本中特異的PCR片段相對或絕i對量，是一種測定特異的PCR片段含量的方式。如測定病i人樣本中病原體的含量、實驗樣本中某一特定的mRNA的含量等。廣州勱博--養殖場核酸提取純化在PCR反應早期，產生熒光的水平不能與背景明顯地區別，而后熒光的產生進入指數期、線性期和最終的平臺期，因此可以在PCR反應處于指數期的某一點上來檢測PCR產物的量，并且由此來推斷模板最i初的含量。有人講過普通PCR后，通過電泳也可以進行定量，其實是將PCR產物的定量與PCR樣本中模板定量相混了。

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非洲為何難以控制？非洲病毒基因組全長 170～190 kb，為有囊膜的雙鏈 DNA 病毒，病毒粒子大小為 175～215 nm，呈正二十面體結構，也是唯i一的蟲媒DNA病毒。非洲病毒是一種急性、熱性、高度接觸性傳i染病，引起豬的死i亡率可達100％，并且非洲具有潛伏期，即使感i染病毒，但沒有臨床癥狀，就有可能通過非實驗室檢驗技術關卡流入市場，進而導致下游食品企業相關問題的出現。其原理：隨著PCR反應的進行，PCR反應產物不斷累計，熒光信號強度也等比例增加。

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非洲與傳統相似且綜合癥狀復雜難辨，臨床上類似于急性，表現為高熱、皮膚充血、流i產、水腫和臟器出血。我國因之前不屬于非洲i疫情國家，因此沒有相關的針對性研究，目前采用的是原農i業部檢疫所于1997年與美國梅島動物病研究所共同研究的檢測方法，主要是PCR和ELISA，標準遵循GB/T 18648-2002非洲診斷技術。隨著相關檢測技術的發展，對于非洲的檢測方法也更加完善。熒光定量PCR結果可以用于定性（判斷一段序列的有無），也可以用于定量（確定DNA拷貝數），即qPCR，而常規PCR只能做半定量。PCR技術是目前i簡單、快速的分子學檢測方法，但該方法的敏感性有限，因此以PCR為基礎的更新方法應運而生。