HPLC常見的8個問題與實用對策

高效液相色譜是色譜法的一個重要分支。該方法已成為化學、醫學、工業、農學、商檢和法檢等學科領域中重要的分離分析技術。以制藥領域為例：我國藥典收載高效液相色譜法項目和數量比較表：

鑒于HPLC在全行業運用越來越廣泛，因此每一個實驗室分析人員都應該熟練掌握并應用HPLC，對于一些常見的故障分析應該做到游刃有余，才能在運行故障的時候即使解決問題，提高工作效率。為此小編整理了常見HPLC故障及對策分析方案，不要錯過哦。

1、保留時間發生漂移或快速變化原因？

關于漂移問題：

① 溫度控制不好，解決方法是采用恒溫裝置， 保持柱溫恒定；

② 流動相發生變化，解決辦法是防止流動相發生蒸發、反應等 ；

③ 柱子未平衡好，需對柱子進行更長時間的平衡。

關于快速變化問題

① 流速發生變化，解決辦法是重新設定流速，使之保持穩定；

② 泵中有氣泡，可通過排氣等操作將氣泡趕出；

③ 流動相不合適，解決辦法為改換流動相或使流動相在控制室內進行適當混合。

2、出現拖尾或雙峰的原因？

① 篩板堵塞或柱失效，解決辦法是反向沖洗柱子，替換篩板或更換柱子；

② 存在干擾峰，解決辦法為使用較長的柱子；改換流動相或更換選擇性好的柱子 ；

③ 可能柱超載，減少進樣量。

3、HPLC柱驗收測試時柱壓過高為什么？

柱壓過高是HPLC柱用戶最常碰到的問題。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的問題，您可按下面步驟檢查問題的起因。

① 拆去保護預柱，看柱壓是否還高，否則是保 護柱的問題，若柱壓仍高，再檢查；

② 把色譜柱從儀器上取下，看壓力是否下降， 否則是管路堵塞，需清洗，若壓力下降，再檢查；

③ 將柱子的進出口反過來接在儀器上，用10倍柱體積的流動相沖洗柱子，（此時不要連接檢測器，以防固體顆粒進入流動池）。這時，如果柱壓仍不下 降，再檢查；只用于使用過的柱子。

④ 更換柱子入口篩板，若柱壓下降，說明您的溶劑或樣品含有顆粒雜質，正是這些雜質將篩板堵塞引起壓力上升。若柱壓還高，請與廠商聯系。一般情況下，在進樣器與保護柱之間接一個在線過濾器便可避免柱壓過高的問題，SGE提供的Rheodyne 7315型，過濾器就是解決這一問題的**選擇。

4、為何出現鬼峰？

①進樣閥殘余峰－－每次用后用強溶劑清洗閥,改進閥和樣品的清洗；

②樣品中未知物－－處理樣品；

③柱未平衡－－重新平衡柱,用流動相作樣品溶劑（尤其是離子對色譜）；

④三氟乙酸（TFA）氧化－－每天新配,用抗氧化劑 ；

⑤水污染（反相）－－通過變化平衡時間檢查水質量，用HPLC級的水 。

5、為何出現峰拖尾？

①柱超載——降低樣品量,增加柱直徑采用較高容量的固定相 ；

②峰干擾——清潔樣品,調整流動相；

③硅羥基作用——加三乙胺,用堿致鈍化柱,增加緩沖液或鹽的濃度降低流動相PH值,純化樣品  ；

④柱內燒結不銹鋼失效——更換燒結不銹鋼,加在線過濾器,過濾樣品 ；

⑤柱塌陷或形成短路通道——更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件；

⑥死體積或柱外體積過大——連接點降至最低,對所有連接點作合適調整,盡可能采用細內徑的連接管 ；

⑦柱效下降——用較低腐蝕條件,更換柱,采用保護柱。

6、除了流速外，還有哪些因素能引起壓力改變？

改變流動相組成和溫度；改變柱長、柱內徑和填料粒度；柱突然阻塞壓力升高（正常情況下其它條件不變柱壓都是逐漸升高的）。

7、怎樣才會使峰位發生重排？

在分析多組分樣品時，僅改變流動相的強度（組成百分比）而不改變其組成，一般僅僅改變所有組分的保留時間，不會發生峰位的重排。

下列條件改變可能發生峰位重排：流動相中換了強溶劑；PH值的改變；柱填料的改變；柱溫的改變；流動相的組成改變（如加入離子對試劑三乙基胺等）。

8、 除了在線脫氣，常用的實驗室脫氣方式還有哪些？

加熱回流脫氣，脫氣效果**，但無法保持；氦脫氣，此方法脫氣效果佳，能除去百分之九十以上的空氣，但氦氣價格太貴，所以用的不多；真空脫氣，效果僅次于氦脫氣，但脫氣過程中容易造成樣品溶液揮發損失；超聲脫氣，只能脫去約百分之三十的空氣，但在實驗室中最常用。目前還是盡量爭取用在線脫氣，方便且效果好。

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