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發布時間:2021-06-08 09:21  
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蛋白表達系統
蛋白表達系統是指由宿主、外源基因、載體和輔助成分組成的體系。通過這個體系可以實現外源基因在宿主中表達的目的。一般由以下幾個部分組成:
1、宿主。表達蛋白的生物體??梢詾榧毦?、酵母、植物細胞、動物細胞等。由于各種生物的特性不同,適合表達蛋白的種類也不相同。
2、載體。載體的種類與宿主相匹配。根據宿主不同,分為原核(細菌)表達載體、酵母表達載體、植物表達載體、哺乳動物表達載體、昆蟲表達載體等。載體中含有外源基因片段。通過載體介導,外源基因可以在宿主中表達。
3、輔助成分。有的表達系統中還包括了協助載體進入宿主的輔助成分。比如昆蟲-桿狀病毒表達體系中的桿狀病毒。
folin―酚試劑法早先是由lowry確定了蛋白質濃度測定的基本步驟。以后在生物化學領域得到廣泛的應用。這個測定法的優點是靈敏度高,比雙縮脲法靈敏得多,缺點是費時間較長,要準確控制操作時間,標準曲線也不是嚴格的直線形式,且專一性較差,干擾物質較多。對雙縮脲反應發生干擾的離子,同樣容易干擾lowry反應。而且對后者的影響還要大得多。酚類、檸檬酸、硫酸銨、tris緩沖液、甘氨酸、糖類、甘油等均有干擾作用。濃度較低的尿素(0.5%),硫酸納(1%),NaNO濃度(1%),TCA(0.5%),乙醇(5%),C4H10O(5%),CH3COCH3(0.5%)等溶液對顯色無影響,但這些物質濃度高時,必須作校正曲線。含硫酸銨的溶液,只須加濃碳酸鈉―NaOH溶液,即可顯色測定。若樣品酸度較高,顯色后會色淺,則必須提高碳酸鈉―NaOH溶液的濃度1~2倍。