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發布時間：2021-10-20 05:38
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抑菌效力
銅綠假單胞菌菌懸液：接種銅綠假單胞菌的新鮮培養物至胰酪胨大豆肉湯培養基中，30～35℃培養18～24小時；取上述培養物用0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋至
用比濁法制成每1ml含菌數約為108cfu。
8.2.2金黃色pt球菌菌懸液：接種金黃色pt球菌的新鮮培養物至胰酪胨大豆肉湯培養基，30～35℃培養18～24小時；取上述培養物用0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋至 ，用比濁法制成每1ml含菌數約為108cfu。
微生物計數
1.血細胞計數法
將稀釋的菌液樣品滴在血細胞計數板上，在顯微鏡下計算4~5個中格的細菌數，并求出每個小格所含細菌的平均數，再以此為依據，估算總菌數。
①此法的缺點是不能區分死菌和活菌。
②對壓在小方格界線上的細菌，應當取平均值計數。
③此法可用于測定培養液中酵母jun種群數量的變化
2.稀釋涂布平板法
原理:每個活細菌在適宜的培養基和良好的生長條件下可以通過生長形成菌落。培養基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。
①這一方法常用來統計樣品中活菌的數目
②統計的菌落數往往比活菌的實際數目低，原因是當兩個活多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。因此統計結果一般用菌落數而不是用活菌數來表示。
③土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含細菌、酵母、芽孢與孢子等的數量均可用此法測定。但不適于測定樣品中絲狀體微生物，例如放線jun或絲狀真菌或絲狀藍細菌等的營養體等。
④此法若不培養成菌落，可通過將一定量的菌液均勻地涂布在玻片上的一定面積上，經固定染色后在顯微鏡下計數，這樣又稱涂片計數法。染色可用臺盼藍，臺盼藍能使死細胞染成藍色，可分別計數死細胞和huo細胞。
微生物限度檢查
計數方法適用性試驗中，采用平皿法或薄膜過濾法時，試驗組菌落數減去供試品對照組菌落數的值與菌液對照組菌落數的比值應在0.5～2范圍內；在我國現有的國家標準中，致病菌一般指"腸道致病菌和致病性球菌"，主要包括沙門氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄qiu菌、致病性鏈球菌等四種，致病菌不允許在食品中檢出。采用MPN法時，試驗組菌數應在菌液對照組菌數的95%置信限內。若各試驗菌的回收試驗均符合要求，照所用的供試液制備方法及計數方法進行該供試品的需氧菌總數、霉菌和酵母菌總數計數。
方法適用性確認時，若采用上述方法還存在一株或多株試驗菌的回收達不到要求，那么選擇回收接近要求的方法和試驗條件進行供試品的檢查。
供試品檢查
檢驗量
檢驗量即一次試驗所用的供試品量（g、ml或c㎡）。
一般應隨機抽取不少于2個zui小包裝的供試品，混合，取規定量供試品進行檢驗。
除另有規定外，一般供試品的檢驗量為10g或10ml；膜劑為100c㎡；貴重藥品、微量包裝藥品的檢驗量可以酌減。檢驗時，應從2個以上zui小包裝單位中抽取供試品，大蜜丸還不得少于4丸，膜劑還不得少于4片。
供試品的檢查
按計數方法適用性試驗確認的計數方法進行供試品中需氧菌總數、霉菌和酵母菌總數的測定。
胰酪大豆胨瓊脂培養基或胰酪大豆胨液體培養基用于測定需氧菌總數；沙氏葡萄糖瓊脂培養基用于測定霉菌和酵母菌總數。
陰性對照試驗 以稀釋液代替供試液進行陰性對照試驗，陰性對照試驗應無菌生長，如果陰性對照有菌生長，應進行偏差調査。
1.平皿法
平皿法包括傾注法和涂布法。除另有規定外，取規定量供試品，按方法適用性試驗確認的方法進行供試液制備和菌數測定，每稀釋級每種培養基至少制備2個平板。
培養和計數 除另有規定外，胰酪大豆胨瓊脂培養基平板在30～35℃培養3～5天，沙氏葡萄糖瓊脂培養基平板在20～25℃培養5～7天，觀察菌落生長情況，點計平板上生長的所有菌落數，計數并報告。菌落蔓延生長成片的平板不宜計數。點計菌落數后，計算各稀釋級供試液的平均菌落數，按菌數報告規則報告菌數。除另有規定外，本檢查法中細菌及控制菌培養溫度為30℃~35℃。若同稀釋級兩個平板的菌落數平均值不小于15，則兩個平板的菌落數不能相差1倍或以上。
菌數報告規則 需氧菌總數測定宜選取平均菌落數小于300cfu的稀釋級、霉菌和酵母菌總數測定宜選取平均菌落數小于100cfu的稀釋級，作為菌數報告的依據。取zui高的平均菌落數，計算1g、1ml或10c㎡供試品中所含的微生物數，取兩位有效數字報告。(1)接種滅菌(2)開啟棉塞(3)管口滅菌(4)挑起菌苔(5)接種(6)塞好棉塞。
如各稀釋級的平板均無菌落生長，或僅zui低稀釋級的平板有菌落生長，但平均菌落數小于1 時，以<1 乘以zui低稀釋倍數的值報告菌數。
