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發布時間：2021-09-06 15:58
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ELISA試劑盒的測定原理
測定技術的基礎在于抗原之間的特異結合反應，所以任何的診斷劑離不開好的原料，如抗原，酶等。以前用于測定的抗原通常為各種純化抗原，而則為純化抗原動物后獲得的多和使用雜交瘤技術得到的，而抗原或的標記物如酶標結合物則通過各種化學合成方法制備。近年來，隨著分子生物學的發展，使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或及其酶結合物等測定試劑幾成為現實的新一代試劑，各種新型使用的測定方法也不斷出現。
ELISA試劑盒的特點
一、靈敏、特異的抗體；
二、穩定的重復性和可靠性；
三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體；
四、適用血漿、組織勻漿液、細胞培養上清液、尿液等等多種標本類型；
五、節省實驗經費。
elisa試劑盒回收率是反應待測物在樣品分析過程中的損失的程度，損失越少，回收率越高，如果作標液1PPM，就是1毫克/升，而作出標準數據為0.99毫克/升，就是說你的回收率是99%，這個與真實成分有密切的關系，說明方法的準確度。比如水中總無機氯含量測定，樣品水中含有無機氯20mg/L，取100mL被測水樣品，加入0.1mL濃度為10mg/mL的含無機氯標準樣品，測定時忽略體積變化，如果測定出樣品中無機氯為29.8mg/L，則認為回收率為99%。
Elisa試劑盒——Elisa實驗常見問題及解決方案
重復性不佳，高CV值
1 樣品不均一 加樣前充分混勻樣品，取樣確保移液位置一致；
2 包被板表面遭到破壞 洗板加樣時盡量小心，避免破壞板的包被表面
3 孔與孔之間的交叉污染 孵育后取下蓋子小心操作，避免孔與孔的污染；封板膜不能重復使用
4 加樣量不一致 樣品稀釋前應充分混勻，盡可能使用同一移液器并裝緊吸嘴
5 邊緣效應（外周孔顯色較中心孔深） 孵育時盡量100 rpm旋轉混勻
6 微量加樣不準確 保證微量加樣的準確性和均一性
7 不正確的洗滌 洗液準確配制；充分洗滌，靜置15秒，確定每一步的洗滌
不正常的標準曲線
1 錯誤的方法重懸標準品 加入正確量的溶液重懸標準品，重懸充分
2 標準品稀釋錯誤 按照說明書要求稀釋標準品
3 標準品污染 使用一次性的滅菌吸頭， 標準品貯存于2-8 ℃
4 錯誤的倍比稀釋步驟 按照說明書倍比稀釋標準品
5 波長選擇錯誤 TMB為底物和以OPD為底物的試劑盒均有使用，而 前者比色波長為450nm，后者為492nm。雙波長比色分析優于單波長。
6 標準品混用 不同批號試劑勿混用
7 試劑盒在運輸途中時間太長，溫度太高，標準品失活 盡量縮短運輸時間，夏季應放冰塊降溫
8 ELISA未終止而直接檢測450nm和620nm TMB顯色需終止后檢測，否則會出現620nm比450nm讀數高的現象。（數值仍有梯度規律）
