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發(fā)布時(shí)間:2021-07-24 02:05  
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固定化酶是通過物理的或化學(xué)的方法,將酶分子束縛在載體上,使其既保持酶的天然活性,又便于與反應(yīng)液分離,可以重復(fù)使用,它是酶制劑中的一種新劑型。運(yùn)用磁性高分子微球作為結(jié)合酶的載體,具有以下優(yōu)點(diǎn):有利于固定化酶從反應(yīng)體系中分離和回收,操作簡(jiǎn)便。對(duì)于雙酶反應(yīng)體系,當(dāng)一種酶的失活較快時(shí),就可以用磁性材料來固載另一種酶,回收后反復(fù)使用,降低成本;磁性載體固載酶放入磁場(chǎng)穩(wěn)定的流動(dòng)床反應(yīng)器中,可以減少持續(xù)反應(yīng)體系中的操作,適合于大規(guī)模連續(xù)化操作;利用外部磁場(chǎng)可以控制磁性材料固定化酶的運(yùn)動(dòng)方式和方向,替代傳統(tǒng)的機(jī)械攪拌方式,提高固定化酶的催化效率。
采用三聚磷酸鈉固定的方法制成氨基多糖微球,并以此氨基多糖微球?yàn)檩d體用交聯(lián)法進(jìn)行脲酶固定化研究。結(jié)果表明,光滑表面微球載體與多孔微球載體對(duì)脲酶的固定化效率分別是51.5%和68%;用1.5cm×15cm柱進(jìn)行尿素轉(zhuǎn)化時(shí)間12min,光滑表面微球載體固定化脲酶和多孔微球載體固定化脲酶對(duì)尿素溶液轉(zhuǎn)化率分別為91.8%和99.99%。這一結(jié)果說明,利用多孔微球載體可有效地提高載體對(duì)脲酶的固定化效率,并且能的分解尿素,提高尿素轉(zhuǎn)化率。
交聯(lián)劑固化法系指對(duì)于一些遇熱易變質(zhì)的可采用化學(xué)交聯(lián)劑,如甲醛、、丁二酮等使乳劑的內(nèi)相固化、分離而制備微球的方法。要求載體材料具有水溶性并可達(dá)到一定濃度、且分散后相對(duì)穩(wěn)定,在穩(wěn)定劑和勻化設(shè)備配合下,使分散相達(dá)到所需大小。常用的載體材料有白蛋白、明膠等。溶劑蒸發(fā)法系指將水不溶性載體材料和溶解在油相中,再分散于水相中形成0/W型乳液,蒸發(fā)內(nèi)相中的,從而制得微球的方法。
在微球釋放的初階段,吸附在微球表面的會(huì)通過擴(kuò)散作用而快速釋放,稱為突釋效應(yīng)。突釋效應(yīng)可能導(dǎo)致人體內(nèi)濃度在短時(shí)間內(nèi)迅速升高,并使得效期縮短,是限制微球廣泛應(yīng)用的關(guān)鍵問題,因此在質(zhì)量控制過程中必須重點(diǎn)關(guān)注突釋率這一指標(biāo)。2010版中國(guó)藥典規(guī)定,微球在開始0.5h內(nèi)的釋放量不得超過40%。目前主要通過體外釋放度實(shí)驗(yàn)考察微球的突釋效應(yīng)。2010版中國(guó)藥典收載的釋放度測(cè)定法包括槳法、籃法、杯法,用以上方法測(cè)定釋放度不僅需要大量的樣品,而且釋放后測(cè)得的濃度偏低,已無法滿足檢驗(yàn)要求。