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低溫生物菌種的影響因素有哪些

菌的質量：保藏的菌種應培養在營養豐富的條件下，使之進入穩定期，稍老一些的菌體對環境抵抗力強。另處，作為冷凍干燥的菌懸液細胞濃度要高不同的菌對冷凍干燥的耐受程度不同，如果保存的菌液細胞濃度不高，就會使以后傳種造成困難，保存期也會受到影響。

保護劑：不同種類的保護劑對不同微生物的作用是不同的，如個別菌種在脫脂乳作保護劑的情況下失敗率高達99.99%，而采用葡聚糖等混和保護劑時失敗率大大減少。一般情況下，那些容易保存的菌種對保護劑的要求不很嚴格，而不易保存的菌種對保護劑的要求卻很苛刻。因此，選擇好的保護劑是冷凍干燥保存菌種的關鍵因素。

干燥速度：實驗表明，慢速干燥比快速干燥存活率高，如青霉菌6h干燥存活率為67.3%，而3h為59%。

空氣的影響：冷凍干燥后空氣對細菌細胞影響較大，可導致細胞損傷進而失敗，故在凍干后應立即在真空下融封，才有利于長期保存。

溫度的影響：在干燥和真空狀況下溫度的影響遠沒有上述幾項因素重要，因此可以在室溫下保存，但許多微生物在4℃保存的存活率要比在室溫下高1倍。

含水量的影響：水分含量過高對菌存活不利，完全脫水也不利于保存，一般把干燥后的細胞含水量控制在3%以下(1%-3%)

低溫生物菌種的孢子分離法

( 1 )褶上涂抹法:選取新鮮、健壯、未開傘、的子實體，洗凈后用0 75 %酒精表面滅菌2 分鐘，然后連同培養基一起放入接種箱內，經馬林熏蒸消毒12 ~ 24 小時，再按無菌操作技術將接種環在子實體菌褶上涂抹，把涂抹后帶孢子的接種環在培養基上劃線接種，，然后置于25 ~ 28 ℃恒溫箱內培養，可得純菌種。

( 2 )孢子印采集法:取滅過菌的載玻片、試紙或黑布，置于新鮮、未開傘或未開裂的子體菌褶的下方。經24 小時后，便落下孢子，形成印痕(即孢子印)。然后，用接種環或玻璃棒蘸取孢子，接種在平面或斜面培養基上，進行恒溫培養，可得純菌種。

( 3 )孢子收集器采集法:孢子收集器由玻璃鐘罩、培養皿、三角架、搪瓷盤等組成。鐘罩下為一搪瓷盤，直徑25 厘米左右，盤內先墊襯4~6 層紗布，中央放1 副9 厘米直徑的培養皿，大蓋口朝下，上放小的，口向上。然后，在上面小的培養皿上放1 只鉛絲繞成的三角架，再將帶孔的玻璃鐘罩蓋上，頂上罩孔用棉塞塞好，用紗布包好整個孢子收集器，置于高壓滅菌鍋或蒸籠內滅菌2小時。

低溫生物菌種的傳代次數

由于微生物存在著自發突變，而突變都是在繁殖過程中發生而表現出來的。所以應盡量避免不必要的移種和傳代，把必要的傳代降低到低水平，以降低自發突發的機率。菌種傳代次數越多，產生突變的幾率就越高，因而菌種發生退化的機會就越多。這要求不論在實驗室還是在生產實踐上，必須嚴格控制菌種的移種傳代次數，并根據菌種保藏方法的不同，確立恰當的移種傳代的時間間隔。如同時采用斜面保藏和其它的保藏方式(真空凍干保藏、砂土管、液氮保藏等)，以延長菌種保藏時間。

低溫生物菌種篩選過程及應用價值

分離(separation)就是將一個混雜著各種微生物的樣品通過分離技術區分開，并按照實際要求和菌株的特性采取迅速、準確、有效的方法對他們進行分離、篩選，進而得到所需微生物的過程。菌株分離、篩選(screening)雖為兩個環節，但卻不能絕然分開，因為分離中的一些措施本身就具有篩選作用。工業微生物產生菌的篩選一般包括兩大部分:一是從自然界分離所需要的菌株，二是把分離到的菌株進一步純化并進行代謝產物鑒別。 ? {cF'RB. 在實驗工作中，為使篩選達到事半功倍的效果，總的說來可從以下幾個途徑進行收集和篩選: 4jisW}%L3

(1)向菌種保藏機構索取有關的菌株，從中篩選所需菌株。 ^ 5u}      

(2)由自然界采集樣品，如土壤、水、動植物體等，從中進行分離篩選。 O|%> <I? I

(3)從一些發酵制品中分離目的菌株，如從醬油中分離蛋白酶產生菌，從酒醪中分離淀粉酶或糖化酶的產生菌等。該類發酵制品經過長期的自然選擇，具有悠久的歷史，從這些傳統產品中容易篩選到理想的菌株。 r N$_(%m_N

菌株的分離和篩選一般可分為采樣、富集、分離、產物鑒別幾個步驟。 8*4X%a=O f

 含微生物樣品的采集  Q?7U  iTZ

自然界含菌樣品極其豐富，土壤、水、空氣、枯枝爛葉、植物病株、爛水果等都含有眾多微生物，種類數量十分可觀。但總體來講土壤樣品的含菌量很多。  G ^H Z4jg