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SPE小柱保留雜質(zhì)固相萃取操作一般有三步：

1）、活化--除去柱子內(nèi)的雜質(zhì)并創(chuàng)造一定的溶劑環(huán)境（注意整個(gè)過(guò)程不要使小柱干涸）。

2）、上樣--將樣品轉(zhuǎn)移入柱，此時(shí)大部分目標(biāo)化合物會(huì)隨樣品基液流出，雜質(zhì)被保留在柱上，故此步驟要開(kāi)始收集（注意流速不要過(guò)快）。

洗脫---用小體積的溶劑將組分淋洗下來(lái)并收集，合并收集液（注意流速不要過(guò)快）.

淋洗通常需要干燥，原因是什么？

回答：淋洗液一般都要干燥，主要考慮以下因素：

1.通常因?yàn)榉聪噍腿∮糜诨衔锏念A(yù)處理，正如反相萃取在色譜中是一種常見(jiàn)的分離方法，反相萃取中的淋洗液通常是一種水相或含水的緩沖溶液，除去水分，從而便于后續(xù)的干燥、濃縮步驟。

2.有些項(xiàng)目，在淋洗步驟完成后，直接用一定量的洗脫液，如1 ml甲1醇洗脫，這個(gè)過(guò)程將洗脫和定容集進(jìn)行一步處理，前者的處理必然會(huì)對(duì)洗脫步驟的定量結(jié)果產(chǎn)

三、就是溶劑互溶問(wèn)題，當(dāng)淋洗過(guò)程中使用的溶劑的極性與洗脫溶劑的極性相差很大時(shí)，就會(huì)產(chǎn)生1乳化分層，洗脫阻力大，洗脫液有被稀釋的危險(xiǎn)等，從而導(dǎo)致洗脫效果不同，從而導(dǎo)致試驗(yàn)結(jié)果的失敗。

離子交換固相萃取小柱方法開(kāi)發(fā)中需要注意的問(wèn)題。

離子交換固相萃取適用于可解離成帶電離子的化合物，其機(jī)理是利用帶電荷的目標(biāo)化合物離子與帶相反電荷的吸附劑之間的靜電吸引力。樣品基質(zhì)可以是極性的，如水溶液，也可以是非極性的有機(jī)溶液，但在實(shí)際應(yīng)用中以水溶液較多，包括生物體液、江河湖海等自然水、廢水等。

常見(jiàn)反相鍵合硅膠吸附劑的類型

C18柱

C18是目前使用zui多的一種SPE柱，根據(jù)2003年的一項(xiàng)統(tǒng)計(jì)，在所有使用

的SPE柱中，C18柱占了56％左右。C18柱的主要官能團(tuán)是十八烷基( octade-cyl),其主要作用力是非極性，第二作用力是極性、陽(yáng)離子交換。在所有鍵合硅

膠SPE吸附劑中，C18柱的非極性吸附能力zui強(qiáng)。因此，強(qiáng)非極性化合物被C18

吸附后可能較難洗脫。C18難吸附極性非常強(qiáng)的分子，如碳水化合物( carbohy

-drates).C18一般被當(dāng)作zui沒(méi)有選擇性或通用型的吸附劑，因?yàn)榻^大多數(shù)有機(jī)分子或多或少含有非極性基團(tuán)，C18可以從水溶液中吸附這些有機(jī)化合物。因此C18對(duì)于同時(shí)分離不同結(jié)構(gòu)的化合物時(shí)較為適用。由于C18的選擇性較低，其zui終萃取物往往沒(méi)有其他選擇性高的填料那么干凈。在蛋白質(zhì)純化中，C18柱是優(yōu)1秀的除鹽工具，因?yàn)闃悠分械柠}在C18柱上沒(méi)有保留。C18的極性副作用力比其他鍵合硅膠SPE吸附劑低許多，主要是碳鏈較長(zhǎng)的原因。

實(shí)際的應(yīng)用

可以說(shuō)， SPE柱的原理和應(yīng)用相當(dāng)廣泛，今天小編就以乳制品中三聚1氰胺的測(cè)定為例，做了一個(gè)小小的實(shí)驗(yàn)，參考 GB/T 22388-2008原乳及乳制品中三聚1氰胺的測(cè)定方法二[1]。該實(shí)驗(yàn)采用了陽(yáng)離子交換 SPE柱(PCX)，因?yàn)槿?氰胺在化學(xué)結(jié)構(gòu)上有三個(gè)胺基-NH2，因而更容易離子化。

本試驗(yàn)用三聚1氰胺溶液在嬰幼1兒奶粉di一段中加入1.0 mg/kg，經(jīng)處理后在液態(tài)溶液中測(cè)定，多次檢測(cè)結(jié)果為0.8~0.9 mg/kg，經(jīng)過(guò)多次洗滌、淋洗后，多次使用，結(jié)果為0.6~0.7 mg/kg。

正相作用機(jī)理

正相模式是指SPE小柱固定相極性大于流動(dòng)相極性的分離模式。主要是利用：

固相萃取材料極性表面與目標(biāo)物極性官能團(tuán)之間的極性相互作用。極性作用力的強(qiáng)度比非極性作用力要大，但比離子作用力小。常見(jiàn)的極性官能團(tuán)包括羥基、胺基、巰基等。弱極性的基質(zhì)環(huán)境有利于極性作用力的形成，因?yàn)槿鯓O性溶劑沒(méi)有能夠與極性固定相形成氫鍵的官能團(tuán)。因此，在SPE的正相萃取中，樣品基質(zhì)多為弱極性的，如正己烷、二氯甲1烷、菜油等，而目標(biāo)物大多含有極性官能團(tuán)。