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你對制備色譜陌生嗎？還不進來看看它的特點

很多初接觸色譜領域的朋友對制備色譜這個名詞比較陌生。其實，在化學化工醫學等廣泛采用的層析法以及薄層色譜就是較為典型的制備色譜，換句話說，將分析色譜的進樣量增大，同時得出大量的所需物質（餾分）的過程就可以稱為制備色譜。分析色譜的目的，是分析出混合物中一個（或者幾個）純物質的含量。制備色譜的目的，是從混合物中得到純物質。而制備色譜系統則是利用制備色譜的思想能得到純化物質的多個分析測試設備聯用的總稱。     分析色譜是制備色譜的基礎。當我們在分析色譜上取得了良好的分離效果時，可以將其放大，應用到制備色譜上，由此，我們需要考慮調整上樣量，流速，梯度：     

1.上樣量的調整：     他與分析色譜柱和制備色譜柱的柱長和柱內徑有關：     

具體關系時；制備柱上樣量/分析柱上樣量=制備柱長/分析柱長*制備柱內徑的平方/分析柱內徑的平方；     

2.流速的調整：     

制備柱流速/分析柱流速=制備柱體積/分析柱體積=制備柱長/分析柱長制備柱內徑的平方/分析柱內徑的平方；     

3.梯度的調整：     

制備柱梯度/分析柱梯度=制備柱體積/分析柱體積*制備柱流速/分析柱流速；

液相色譜操作要求     

1、液相開機前先檢查洗針液、柱塞清洗液是否足夠；     2、液相開機后，首先確保柱塞清洗運行，再執行其它操作。     3、開機排氣時，有“purge”閥的儀器應先打開“purge”閥再開泵以5ml/min的流速排氣，關“purge”閥的時候先把流速降到 1ml/min再關，切不可吧順序弄反，否則系統壓力會瞬間變高。     4、使用自動進樣器時，建議啟用“洗針進樣”方式，以降低樣品殘留，對于有些強殘留的物質可以選擇降低濃度或減小進樣量。     5、液相色譜系統壓力高時考慮色譜柱堵了，如果將液相色譜換成兩通壓力依舊高，應該考慮系統管路某部分堵了。管路堵的情況下可以使用熱水清洗。對堵塞的通道可以用熱水清洗。

液相色譜不是堵就是漏，原因很簡單！

使用液相色譜儀的小伙伴肯定會遇到漏氣和漏液的狀況，流動相是造成液相色譜各種問題的主要源頭。液相色譜常見的故障一是堵，二是漏。今天就這兩部分別展開討論 。首先，為何會堵?“堵”的表現現象就是柱壓異常升高，直接原因就是流路不暢。堵塞的主要位置就是在色譜柱的前端，主要原因就是流動相里有雜質，雜質的主要來源就是細菌。

制備液相色譜特點和優點

高壓—壓力可達150~300Kg/cm2。色譜柱每米降的壓為75 Kg/cm2以上。

高速—流速為0.1~10.0 ml/min。

高效—可達5000塔板每米。在一根柱中同時分離成份可達100種。

高靈敏度—紫外檢測器靈敏度可達0.01ng。同時消耗樣品少。

HPLC與經典液相色譜相比有以下優點：

速度快—通常分析一個樣品在15~30 min，有些樣品甚至在5 min內即可完成。

分辨率高—可選擇固定相和流動相以達到較好分離效果。

靈敏度高—紫外檢測器可達0.01ng，熒光和電化學檢測器可達0.1pg。

柱子可反復使用—用一根色譜柱可分離不同的化合物。

樣品量少，容易回收—樣品經過色譜柱后不被破壞，可以收集單一組分或做制備。