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發布時間:2021-09-13 18:26  
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ELISA試劑盒的應用技術
ELISA檢測試劑盒應用定性夾心檢測技術,用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條,這些多肽是中國型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強的肽段,分別來自于該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。將樣品或標準品加入孔中并孵育,如果其中存在HEV IgM,這些就會與HEV 的多肽抗原結合,并固定在上面,洗板除去其它非特異性和樣品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根過氧化物酶)酶結合物,經第二次孵育后,酶結合物就會與孵育結合上的HEV IgM相結合,洗板除去未結合的酶結合物,加入TMB底物溶液,在第三次孵育時會發生酶-底物反應,只有那些含有HEV IgM和酶結合物所形成的復合物的孔才會發生顏色變化,加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應,并在波長: 450nm處測量O.D.值,按照本HEV IgMelisa試劑盒的測試標準, O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認為是初試陽性。
ELISA試劑盒的操作方法——間接法
以下是北京中檢維康生物技術有限公司為您一起分享的內容,北京中檢維康生物技術有限公司專業供應ELISA試劑盒,歡迎新老客戶蒞臨。
1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過夜;
2.次日洗滌3次;
3.加一定稀釋的待檢樣品(未知)0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌;
4.(同時做空白、陰性及陽性孔對照)于反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二(抗)0.1ml;
5.37℃孵育35-60分鐘,洗滌;
6.然后用DDW洗滌。
其余步驟同“雙夾心法”的4、5、6。
ELISA試劑盒——會出現的問題及解決辦法
吸光值均偏高(或線性不夠陡)。
a.原因:室溫太高(>25℃)。
解決辦法: 若無法降低室內溫度,請適當縮短步驟4的溫育時間。
b.原因:底物溶液受到污染。
解決辦法: 若發現底物溶液已呈現淡藍色,請不要再使用。
c.原因:反應時間超過太久。
解決辦法:請控制反應時間。
d.原因:酶標記物污染了盒內其它試劑。
解決辦法:使用過的吸頭應立即丟棄,可避免試劑間相互污染,凡是試劑(特別是酶標記物與底物溶液)接觸過的容器應立即清洗干凈。(先以漂白水浸泡,再以清水沖洗干凈,可確保無殘留)
Elisa試劑盒原理及用途
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測肌肉組織、牛奶等樣品中的米松(Dexamethasone,DEX),試劑盒由預包被偶聯抗原的酶標板、酶標記物、、標準品及其他配套試劑組成。檢測時,加入標準品或樣品溶液,樣本中的米松藥品和酶標板上預包被偶聯抗原競爭抗米松藥類,加入酶標記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含米松藥品含量成負相關,與標準曲線比較即可得出樣本中米松藥品的殘留量。