疏水層析介質服務放心可靠「在線咨詢」

以純化溶瘤病毒為例，由于其在生產過程中存在宿主蛋白等雜質，純化前 SEC測試純度為6.5%。純化采用兩種基質相同的介質，其表面化學功能也很一致，主要區別是前者是無孔實心的層析介質，而后者是傳統的多孔層析介質。層析純化的方法是陰離子交換吸附然后梯度洗脫（Bind-elute）模式。從層析圖譜可以看出，在洗脫及CIP過程中無孔介質洗脫雜質更小，峰值更低，意味著上樣過程中結合的雜質會更少，有利于表面結合的病毒分子純化。通過對層析洗脫液SEC純度分析比較，發現用傳統的多孔層析介質實驗得到的病毒樣品純度為54%（圖 ），而用無孔的同類型介質實驗得到的病毒純度達到接近90%（圖 ）。

為了解決傳統整體柱制備技術難題，納微與臺灣材料合作開發出孔徑及孔隙率可精l確控制的新方法(Tantti整體柱)。這種方法是利用單分散聚合物微球為模板填充在整體柱中，然后把單體及交聯劑填充到微球的空隙中，加熱聚合后，再把模板微球清洗掉留下尺寸與微球模板大小一致的多孔整體柱。整體柱的孔徑大小可以通過模板微球大小進行精l確調節，不受反應條件影響，因此，柱與柱重復性好，且容易放大生產等。以單分散微球為模板制備孔徑可以精l確控制整體柱的孔徑大小，克服了傳統整體柱制備方法依靠相分離形成孔道結構不穩定的缺陷。這種的整體柱將極大提升其病毒的分離純化性能，甚至為病毒、病毒類（疫l苗）、腺伴隨病毒(AAV)等生物大分子的分離純化帶來革命性的影響。

抗l體的層析分離步驟基本都可以采用標準化的三步曲：步用Protein A介質進行抗l體捕獲和濃縮；第二步用離子交換進行中間純化以去除多聚體，宿主蛋白等雜質；第三步是精純去除剩余DNA，Endotoxin,Protein A 等微量雜質。在這三步抗l體的分離純化過程中，步的Protein A親和捕獲占據分離純化成本80%以上，也是下游分離純化的瓶頸所在。親和層析之所以成本高的主要原因：首先是Protein A 價格昂貴，其價格是普通層析介質十幾倍；第二，Protein A使用壽命短，一般離子交換填料使用壽命多達1000次，而親和填料壽命通常在100-200次；第三，Protein A 用于抗l體的捕獲和濃縮，需要處理大體積的發酵液，而親和步驟載量往往又低于陰陽離子交換層析，使得親和層析介質使用量比中間純化或精純的要多得多。因此，要降低抗l體的生產成本，解決抗l體的生產瓶頸關鍵在于改進步Protein A 親和捕獲。

之二：通透大孔徑基球微替代小孔微球    Protein A 基球孔徑大小會影響生物分子在介質的傳質速度和有效載量，孔徑越大，分子傳質速度越快，在高流速下具有高載量。基于軟膠基質的GE Protein A親和介質孔徑較小，比表面積高，其靜態吸附載量高，但傳質阻力大，在駐留時間短，流速快的條件下，動態載量下降的很快。納微經過優化篩選，專門設計的大孔結構基球，其孔徑達到GE Protein A 介質的一倍左右。因此該介質傳質速度快，使得介質在高流速下具有高載量。從實驗測試數據可以看到，納微UniMab與GE MabSelectSuRe在駐留時間大于4分鐘時，載量都差不多，當駐留時間小于2分鐘時UniMab的載量比MabSelectSuRe載量高50%以上, 而且速度越快UniMab載量優勢越明顯。生產效率是由動態載量和流速共同決定，流速越快載量越高，生產效率越高，成本越低，但親和層析介質的動態載量與流速成反比，流速越快，載量越低，因此對于每個Protein A親和介質純化效率都會隨著流速升率逐步提高，到了一個的流速后，如果繼續增加流速，純化效率反而降低。林東強實驗證明對于批次親和層析，駐留時間是2分鐘時生產效率達到，而駐留時間在2分鐘條件，UniMab的動態載量比MabSelectSuRe 高50%以上。對于連續層析駐留時間是1分鐘時生產效率，而這個保留時間，UniMab的動態載量更是MabSelectSuRe一倍以上。另外從流穿曲線對比圖也可以看出具有大孔結構及高度粒徑均勻性的單分散Protein A親和層析介質與多分散軟膠PorteinA 介質相比具有更陡的穿透曲線，說明納微單分散層析介質具有更暢通的孔道結構，分子擴散速度快，流穿少，回收率高。因此利用納微大孔結構微球不僅可以提高分子傳質速度，提高生產效率，降低成本，而且在連續層析中，具有更明顯的優勢。