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等溫核酸試劑盒

據(jù)介紹，RPA檢測(cè)的靈敏度很高，能夠?qū)⒑哿康暮怂?尤其是DNA)模板擴(kuò)增到可以檢出的水平，從單個(gè)模板分子得到大約1012擴(kuò)增產(chǎn)物。而且RPA還用不著復(fù)雜的樣品處理，適用于無法提取核酸的實(shí)地檢測(cè)。RPA不僅可以對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行終點(diǎn)檢測(cè)，還可以對(duì)擴(kuò)增過程進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)控，甚至可以通過試紙條(側(cè)流層析試紙條LFD)讀取結(jié)果。

目前，TwistAmp? 試劑盒的擴(kuò)增子長(zhǎng)度在500bp以內(nèi)。不過，經(jīng)過特別優(yōu)化的RPA擴(kuò)增，也可以生成更長(zhǎng)的擴(kuò)增產(chǎn)物，或者減慢擴(kuò)增速度(便于定量)，甚至在更低的溫度下進(jìn)行反應(yīng)。

什么是RPA?

概念:

重組酶聚合酶擴(kuò)增（Recombinase Polymerase Amplification，RPA），被稱為是可以替代PCR的核酸檢測(cè)技術(shù)。RPA技術(shù)主要依賴于三種酶:能結(jié)合單鏈核酸（寡核苷酸引物）的重組酶、單鏈DNA結(jié)合蛋白（SSB）和鏈置換DNA聚合酶。這三種酶的混合物在常溫下也有活性，適宜反應(yīng)溫度在37°C左右。

重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù)（RPA)是2006年由英國(guó)科學(xué)家研發(fā)的一種核酸恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)。它是利用多種酶參與，在體外模擬生物體內(nèi)DNA復(fù)印，恒溫條件下短時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)靶基因大量擴(kuò)增，既可以擴(kuò)增DNA，也可以擴(kuò)增RNA。RPA技術(shù)具有恒溫、快速、便攜、靈敏度高、特異性強(qiáng)和操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，是目前很有望替代PCR技術(shù)的核酸等溫?cái)U(kuò)增方法，在基層現(xiàn)場(chǎng)診斷中，具有廣闊的應(yīng)用前景。

相對(duì)來說RPA是很好的恒溫?cái)U(kuò)增法，可在較低溫下恒溫?cái)U(kuò)增，不需要復(fù)雜儀器設(shè)備，操作簡(jiǎn)單、反應(yīng)時(shí)間短，特異性好、靈敏度高，可采用電泳、熒光、側(cè)向流試紙等多種方式檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物

與假陰性相對(duì)的是假陽(yáng)性。這通常是由于樣本被污染或是核酸檢測(cè)試劑盒被污染導(dǎo)致的。“缺少嚴(yán)格控制條件的實(shí)驗(yàn)室環(huán)境、不的檢測(cè)操作，以及樣本本身的污染，都會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性出現(xiàn)?！庇腥烁嬖V記者，“由于事發(fā)突然，很多地方可能沒有檢測(cè)條件，因此需要把樣本送到符合條件的實(shí)驗(yàn)室去，而運(yùn)輸途中也有污染風(fēng)險(xiǎn)。”此外，檢測(cè)試劑盒的探針引物或酶受到污染之后，也會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性。