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發布時間：2021-09-03 14:28
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熒光分光光度計測試注意事項
①樣品應盛在四面透光的石英比色皿（熒光池）中，如果是揮發性樣品應使用帶塞的熒光池。
②在熒光分析時，為了得到穩定且可靠的數據，一般需要開機預熱氙燈大約30min。如果儀器光源采用的是閃爍氙燈，預熱時間可以縮短到10min左右。對某些易感光、易分解的熒光物質，盡量采用長波長、低人射光強度及短時間光照。
③溫度變化可引起熒光強度的改變。通常降低溫度，有利于提高熒光量的子產率，熒光強度增大。溫度影響熒光強度的顯著程度因樣品而異，大部分熒光物質的熒光強度受溫度影響不大，測試溫度變化不超過±3℃，對測試結果幾乎無影響。
④當熒光物質是弱酸或弱堿時，溶液的pH對熒光強度有較大影響。因為弱酸或弱堿在不同酸度中，分子和離子的電離平衡會發生改變，而熒光物質的熒光強度會因其離解狀態發生改變。
⑤分子結構中存在π-π共軛的熒光物質在極性溶劑中，熒光效率顯著增強。溶液中表面活性劑的加入能夠顯著提高熒光強度。
⑥瑞利散射和拉曼散射是溶劑的兩種散射光，應注意不要誤把瑞利散射和拉曼散射光譜當做熒光光譜。瑞利散射光波長與激發光波長相同，拉曼散射與激發光波長不同，而熒光物質的熒光波長與激發光波長無關，因此可以通過選擇適當的激發波長將拉曼散射光與熒光分開。在測試時選擇合適的狹縫寬度，或者空白扣除，也可以對散射光的影響進行校正。
⑦熒光物質分子與溶液中其它物質分子之間作用導致熒光強度降低，常見的熒光猝滅劑，如鹵素離子、重金屬離子、硝基化物質、重氮化合物等。
⑧測試過程中注意不要肉眼盯著氙燈光源看，以防眼睛造成損傷。
⑨儀器房應注意經常通風，避免產生的臭氧在室內富集。
熒光分析
熒光分析就是基于物質的光致發光現象而產生的熒光的特性及其強度進行物質的定性和定量的分析方法。目前，也廣泛地作為一種表征技術來研究體系的物理、化學性質及其變化情況，例如生物大分子構象及性質的研究。
熒光光譜適用于固體粉末、晶體、薄膜、液體等樣品的分析。根據樣品分別選配石英池（液體樣品）或固體樣品架（粉末或片狀樣品）。
熒光光譜分析可與顯微鏡耦合，獲得微區分析結果。熒光是無損傷、非接觸的分析技術，還可用于自動檢驗、批量篩分、遠程原位分析和分析。
熒光分析的優點：（1）靈敏度高；（2）選擇性強；（3）試樣量少、方法簡單；（4）提供較多的物理參數。但是也存在應用范圍不夠廣泛、對環境敏感（干擾因素多）等缺點。
熒光光譜定量分析
在低濃度時，溶液的熒光強度與熒光物質的濃度成正比：F=Kc。其中，F為熒光強度，c為熒光物質濃度，K為比例系數。這就是熒光光譜定量分析的依據。
上述關系不適用于熒光物質濃度過高時，熒光物質濃度過高，其熒光強度反而降低。原因有：
（1）內濾效應。一是，當溶液濃度過高時，溶液中雜質對入射光的吸收作用增大，相當于降低了激發光的強度。二是，濃度過高時，入射光被液池前部的熒光物質強烈吸收，處于液池中、后部的熒光物質，則因受到入射光大大減弱而使熒光強度大大降低；而儀器的探測窗口通常對準液池中部，從而導致檢測到的熒光強度大大降低。
（2）相互作用。較高濃度溶液中，可發生溶質間的相互作用，產生熒光物質的激發態分子與其基態分子的二聚物或其他溶質分子的復合物，從而導致熒光光譜的改變和/或熒光強度下降。當濃度更大時，甚至會形成熒光物質的基態分子聚集體，導致熒光強度更嚴重下降。
（3）自淬滅。熒光物質的發射光譜與其吸收光譜呈現重疊，便可能發生所發射的熒光被部分再吸收的現象，導致熒光強度下降。溶液濃度增大時會促使再吸收現象加劇。
當然，熒光強度的影響因素還有溶劑、溫度、pH值、散射光等，在定量分析中需要加以考慮。
熒光光譜定量分析的計算與其他光譜類似，包括標準曲線法、比例法等。
