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發布時間:2021-09-16 08:17  
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新技術提升蛋白質結晶成功率
超構材料21世紀初被提出,截至目前它仍然是非常活躍的前沿領域。其中的微結構,大小尺度與它作用的蛋白質尺寸相當,因此得以對蛋白質的結晶過程施加干預,對蛋白質的聚集態形成起到促進作用,從而降低了兩步成核中的步能壘。其次,通過材料本體結構的晶格對聚集態蛋白質分子進行引導排列,促進蛋白質分子的有序排列和晶核形成,從而降低了兩步成核中的第二步能壘。
盡管通過實驗和理論證明了超構材料在蛋白質結晶方面的巨大潛力,但要充分發揮其優勢則必須兼容當前蛋白質結晶通過的高通量篩選系統。目前國際上普遍采用液體處理機器人來進行高通量結晶篩選,篩選一個結晶條件的蛋白樣品消耗體積為納升級別。因此,如何快速,穩定地將成核劑添加到高通量系統的同時,又不對結晶系統造成大的影響成為急需解決的問題。
隨后通過優化生產和制備工藝,考察了各生產因素對成核劑尺寸和穩定性的影響,確定了適合高通量蛋白質結晶篩選的成核劑混懸劑的制備工藝流程。這是一種含有具有表面超結構的有機無機復合材料,其尺寸分布在幾百納米到幾微米之間。該產品的組成為材料顆粒與水溶液的混懸液。在蛋白質結晶篩選實驗中,使用該產品有助于提高蛋白質結晶篩選的成功率,包括改善晶體的分辨率和篩選新的結晶條件,使不結晶或難結晶的蛋白質成功結晶,展現了巨大的應用潛力,使用該成核劑已經成功結晶和解析十多個蛋白質晶體結構。
此外,針對能夠結晶的蛋白質分子,成核劑混懸液在篩選新的結晶條件,提升結晶的分辨率方面同樣有效。目前,先進院已經與國內超過18個實驗室開展了合作,助力我國的生命科學和生物研究。
蛋白結晶板使用
用于人工和高通量蛋白晶體生長以及其他生物或有機晶體生長的設備和方法.一微孔板包含多個單元格,以及一限定微孔板中單元格的邊框.在每個單元格中至少存在一個上部開口的孔.單元格中的每個孔底部可以封閉,或者其底部是開口的,但孔底部由一獨立部件封閉,其可以為獨立的膜或板(例如塑料,玻璃或金屬)或一模制部件。
獲得晶體及提高晶體質量是蛋白質結晶方法學中的兩大基本問題.為解決這兩個問題,結構生物學家已發展了許多方法,其中針對蛋白質本身進行分子改造是非常重要的方法之一.通過蛋白質工程技術,如突變,還原化修飾,剪切或刪除構象柔性環區,融合蛋白,復合物共結晶,原位蛋白質水解等方法對蛋白質本身進行分子改造。
蛋白結晶板發展
可明顯提高其結晶成功率及晶體質量.隨著該方面成功案例的不斷積累,分子改造技術越來越凸顯出其在蛋白質結構解析中的重要作用,特別是對一些難以結晶或提高晶體質量的蛋白質而言,其應用價值更不可忽視.針對近年來分子改造技術在蛋白質結晶中的應用進行了回顧與總結,并展望了其未來的發展。
在高密度微孔板技術和DNA微陣列技術的基礎上發展起來的蛋白質芯片技術,能夠在蛋白質水平上進行基因高通量表達分析,從而成為蛋白質組學研究的有效方法.蛋白質芯片依靠手工,壓印或噴墨的方法將探針蛋白點樣在化學膜,凝膠,微孔板或玻片上形成陣列,經過與樣品的雜交捕獲靶蛋白。
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蛋白質晶體板
半胱氨酸、賴氨酸的蛋白質、以及含有金屬離子的蛋白質。這些蛋白質的吸附會導致重組蛋白質純度大幅降低。為了解決這一問題,我們制備了兩類新材料,用于提高重組蛋白質純度:1)通過分子印跡技術,以組氨酸標簽為模板,在IMAC材料表面形成組氨酸標簽的分子印跡層,使得不含組氨酸標簽的蛋白質無法靠近IMAC材料,從而提高重組蛋白純度;2)通過活性可控自由基聚合,在IMAC基質材料表面包被了一層尺寸可控的聚合物涂層。在聚合物網絡的篩分作用下,進而實現帶組氨酸標簽的重組蛋白的純化。